[发明专利]一种精子冻存液及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及精子冻存领域，特别涉及一种精子冻存液及其制备方法和应用。一种精子冻存液，包括以下组分：氯化钾、硫酸镁、氯化钙、碳酸氢钠、磷酸氢二钾、丙酮酸钠、乳酸钙、葡萄糖、蔗糖、谷氨酰胺、甘氨酸、HEPES、庆大霉素、甘油、人血清白蛋白、维生素E、维生素C、维生素B12。本发明提供的精子冻存液，各组分共同配合，更全面的维持精子的渗透压、抵抗外界环境变化的应变能力等，该冻存液用于精子液体的低温保存后，能较长期限的保持精子的存活率以及活性。

技术领域

本发明涉及精子冻存领域，具体而言，涉及一种精子冻存液及其制备方法和应用。

背景技术

人类精子冻存对于人类生殖健康十分重要。短期内不愿意生育者可以在年轻时冻存有活力的精子，待需要时解冻后进行人工受精。又或者要接受放疗或者化疗的病人，或者即将要进入对生殖健康有害的工作前，可以将精子冻存起来，方便以后获得健康的后代。

精子冻存的过程主要是通过逐渐降温使得精子最终冻存在液氮中，冻存过程中产生的冰晶对精子细胞损害极大。精子冻存液的作用就是保护精子在冻存过程中免受伤害。

目前市面上已有的精子冻存液大部分添加了卵黄物质，但是卵黄来源于鸡蛋，潜在生物风险。并且蛋黄里面的生物活性蛋白物质可以潜在过敏反应，在后期清洗中难以去除。

在逐级低温的过程中，精子细胞会发生氧化应激反应，导致精子细胞凋亡。因此，在冷冻的过程中需要防止精子细胞的氧化应激。而目前的产品几乎没有针对氧化应激的措施。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种精子冻存液及其制备方法和应用，该精子冻存液杜绝了在冻存过程中的潜在过敏反应，并且在冻存过程中能有效防止精子的氧化应激反应，经过较长时间的保存后，精子成活率高，且质量高。

为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

一种精子冻存液，以所述冻存液的体积计，包括以下组分：氯化钾5.5±0.2mM，硫酸镁0.40±0.05mM，氯化钙2.0±0.1mM，碳酸氢钠25.0±0.5mM，磷酸氢二钾0.20±0.01mM，丙酮酸钠0.20±0.01mM，乳酸钙2.00±0.05mM，葡萄糖8.0±0.2mM，蔗糖40.0±0.5mM，谷氨酰胺0.10±0.01mM，甘氨酸1.00±0.05mM，HEPES 20.0±0.5mM，庆大霉素1.0±0.05mg/ml，甘油体积百分数10％±1％，人血清白蛋白5±0.2mg/ml，维生素E 100±10μg/ml，维生素C100±10μg/ml，维生素B12 100±10μg/ml。

本发明提供的精子冻存液，各组分共同配合，更全面的维持精子的渗透压、抵抗外界环境变化的应变能力等，该冻存液用于精子液体的低温保存后，能较长期限的保持精子的存活率以及活性。

本发明提供的精子冻存液，冻存液的溶剂为水，一般用超纯注射用水。

进一步地，所述精子冻存液的pH值为7.1-7.5，渗透压为590-610mOsm/kg。

进一步地，内毒素含量小于1.0EU/ml。

本发明还提供了上述的精子冻存液的制备方法，包括以下步骤：

(a)氯化钾、硫酸镁、氯化钙、碳酸氢钠、磷酸氢二钾、丙酮酸钠、乳酸钙、葡萄糖、蔗糖和HEPES加水制成溶液；

(b)加入谷氨酰胺、甘氨酸、庆大霉素、甘油、维生素E、维生素C和维生素B12，混合均匀；

(c)加入人血清白蛋白，定容即可。