[发明专利]一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法

权利要求书

1.一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1)制备周期性结构的金纳米孔阵列：将PMMA旋涂在玻璃基板上，然后将基板暴露于电子束，产生纳米孔阵列，在甲基异丁基酮/异丙醇溶液中显影后接着用异丙醇冲洗，然后通过热蒸发镀膜技术将金膜蒸发到纳米孔阵列上，得到所述周期性结构的金纳米孔阵列，清洗后备用；

所述金纳米孔阵列为层状结构，共有三层，底层为Si片，中间层为厚度200nm的PMMA纳米阵列，上层为50nm厚的金膜；金纳米孔阵列呈周期性排列的孔洞结构，孔为圆形，半径为100nm，深度为200nm，孔与孔之间的距离为604nm；步骤2)配置DNA混合溶液：将不同表观遗传修饰的待测DNA分别溶解在Tris-HCl缓冲液中得到DNA溶液，取DNA溶液与TCEP溶液常温下混合反应，得到所述DNA混合溶液；

所述待测DNA的表观遗传修饰方式包括5-羟甲基胞嘧啶、5-醛基胞嘧啶和5-羧基胞嘧啶；

步骤3)不同DNA表观遗传修饰的拉曼检测：将步骤2)制得的DNA混合溶液滴涂在步骤1)制备的金纳米孔阵列中，0.5h后取出并用氮气吹干，用拉曼仪器在金纳米孔阵列表面不同区域处采集拉曼信号进行检测，观察不同待测DNA表观遗传修饰方式拉曼光谱图的特征差异，根据拉曼信号强度和位移的变化实现不同待测DNA表观遗传修饰的检测。

2.根据权利要求1所述的一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法，其特征在于，步骤2)所述DNA溶液与TCEP溶液的摩尔浓度比例为1：50。

3.根据权利要求1所述的一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法，其特征在于，步骤2)所述DNA溶液的配制过程为：将不同表观遗传修饰的待测DNA溶解在10mmol/LpH＝7.4的Tris-HCl溶液中，使其浓度为100μmol/L。

4.根据权利要求1所述的一种DNA表观遗传修饰的表面增强拉曼光谱检测方法，其特征在于，步骤3)所述采集拉曼信号进行检测的过程为：采用激发波长为785nm、功率为35mW的拉曼光谱仪，采集金纳米孔阵列表面50个不同区域的拉曼光谱，获得平均拉曼光谱。