[发明专利]淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法

说明书

本发明公开了一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法，属于生物技术领域。本发明方法包括：(1)挑取、收集纤毛虫，清洗虫体表面；(2)将清洗所得干净虫液粘附到经多聚赖氨酸处理过的干净载玻片表面，将虫液分成若干小滴后吹干；(3)向虫体表面滴加硝酸银溶液，静置后清洗残留；(4)利用卤素冷光源照射显影；(5)冲洗浮渣，晾干；(6)向虫体表面滴加中性树胶，加盖玻片后封片。本发明方法能够高效、优质地制备淡水纤毛虫干银染色样品，同时大大简化了制片步骤，且本发明无需使用显影液，节约了原料成本。另外本发明样品在硝酸银染色后置于卤素冷光源下照射显影，不受天气因素影响，更易于控制。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种原生动物银染样品的制备方法，更具体地说，本发明涉及一种淡水纤毛虫干银染色样品的快速制备方法。

背景技术

纤毛虫(Ciliata)是单细胞原生动物中种类最多、结构最复杂、最高等的一个门类。因其生命周期中至少某一阶段存在纤毛，且以纤毛作为运动和摄食器官，故名纤毛虫。纤毛虫虽然个体十分微小，通常要借助显微镜才能观察到，但它们在生物界和自然环境中具有极为重要的作用，同时也与我们人类的生活密切相关。纤毛虫中一些营自由生活的类群作为浮游和底栖生态系统中微食物网的重要组成部分，在物质循环和能量传递过程中起着重要的枢纽作用；纤毛虫中一些营共生生活的类群在高等动物对食物的消化利用过程中起着至关重要的作用，如反刍动物的瘤胃纤毛虫可帮助宿主消化纤维素；纤毛虫中也有一些营寄生生活的类群，是人类及其他脊椎动物的重要病原体，如结肠小袋纤毛虫可引起人类及其他很多哺乳动物的肠道溃疡和痢疾，多子小瓜虫、斜管虫等可造成水产养殖鱼类严重的鳃损伤，并引起大量死亡。另一方面，纤毛虫由于其独特的结合生殖方式和双核态以及高度特化的细胞器结构，在细胞生物学和遗传学领域具有十分重要的研究价值。因此，纤毛虫的研究越来越受到人们的重视和关注。

在纤毛虫乃至所有的生物学研究当中，分类学是最基本也是最关键的。只有在对物种进行准确鉴定的基础上，才能更深入和更有效地开展后续研究工作。纤毛虫的银线系统(silverline system)是指由纤毛虫表膜的毛基体及附属纤维形成的线状或网格状结构，因其可被硝酸银等染色剂着色，故称银线系统；该结构在纤毛虫的分类学和细胞发生学研究中是极为重要的特征。

干银法是用来显示纤毛虫银线系统的良好方法。Klein在上世纪20年代首先应用干银法来显示某些淡水和土壤生种类的银线结构。这种方法的缺点是受制于天时，需要日光照射显影。Fernandez-Galiano于1976年对Klein的方法进行了改进，应用蛋清作为媒染剂，滴加硝酸银后改在日光灯下显影，并用显影剂增强显影。该方法使制片质量有所提高，但对蛋清配制和保存时间及蛋清涂布的厚薄等要求苛刻、不易掌握，常造成制片失败。宋微波于1995年对干银法进行了再次改进，在制片初始引入蛋白水做媒染剂以防止海洋种类水洗时的虫体溃破现象，使该方法成为可广泛应用于海、淡水种类的制片方法。然而，如果只针对淡水纤毛虫而言，干银染色法仍有不少可改进和优化的地方，以达到更快速、优质制片之目的。

基于上述理由，特提出本申请。

参考文献：

Klein B.1926.Ergebnisse mit einer Silbermethode bei Ciliaten.Archiv füProtistenkunde,56:243-279.

Fernandez-Galiano D.1976.Silver impregnation of ciliated protozoa:procedure yielding good results with the pyridinated silver carbonatemethod.Transactions of the American Microscopical Society,95:557-60.

宋微波，王梅.1995.应用于纤毛虫银线系染色的干银法新改良.动物学杂志30:38-39.

发明内容