[发明专利]突变改造Prx6蛋白及其表达基因、制备方法和应用

权利要求书

1.一种突变改造Prx6蛋白，其特征在于，通过定点突变技术对人Prx6蛋白进行以下突变改造得到：

第39位氨基酸由His突变成Asn，第50位氨基酸由Glu突变为His，第78位氨基酸由Asp突变为由Arg，第104位氨基酸由Asp突变为Lys，第132位氨基酸由Arg突变为Gln；

突变改造后Prx6蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.一种编码权利要求1所述的突变改造Prx6蛋白的表达基因，其特征在于，所述表达基因的序列为：编码权利要求1的突变改造Prx6蛋白的核苷酸序列。

3.根据权利要求2所述的突变改造Prx6蛋白的表达基因，其特征在于，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求2或3所述的表达基因。

5.一种重组细胞，其特征在于，包含权利要求4所述的表达载体。

6.一种权利要求1所述的突变改造Prx6蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）获得人Prx6蛋白表达基因，并将上述表达基因插入至载体中，构建重组表达载体；

（2）以突变引物构建突变体质粒；

（3）将上述突变体质粒转入宿主细胞中，通过筛选得到阳性重组细胞，诱导表达，即得。

7.根据权利要求6所述的突变改造Prx6蛋白的制备方法，其特征在于，

步骤（1）中，通过下述方法获得人Prx6蛋白表达基因：以人宫颈癌hela细胞株cDNA文库为PCR反应模板，设计扩增引物进行PCR扩增反应，扩增产物即为人Prx6蛋白表达基因；

步骤（1）中，通过以下方法将上述表达基因插入至载体中，构建重组表达载体：将获得的人Prx6蛋白表达基因及质粒 pColdⅠ进行Hind III/ Xba I双酶切，获得含有Hind III/Xba I酶切位点的人Prx6基因和pColdⅠ载体，回收酶切的载体片段；将酶处理后的人Prx6基因片段和pColdⅠ载体在T4连接酶作用下进行连接；连接产物转入DH5α感受态菌中，筛选阳性克隆，得到pColdⅠ-hPrx6重组质粒，即为重组表达载体；

步骤（2）中，通过以下方法构建突变质粒：根据预定突变位点设计突变引物，加入上述pColdⅠ-hPrx6重组质粒进行突变PCR反应，于反应产物中加入Quick Cut DpnI限制性内切酶，将原始模板序列降解；酶切后合成产物转化DH5α感受态，对转化子进行菌落 PCR 验证，并提取质粒测序，得到预定序列的突变质粒；

步骤（3）中，具体步骤如下：将上述突变质粒转化BL21(DE3)感受态细胞，在含Amp和Kana抗性的固体培养基中筛选阳性克隆；挑取阳性单克隆于含Amp、Kana培养基中培养，加IPTG，诱导表达后收菌，即得突变改造Prx6蛋白。