[发明专利]一种调节柑橘脂肪酸不饱和度的抗旱菌剂制备及应用方法

权利要求书

1.一种调节柑橘脂肪酸不饱和度抗旱菌剂的应用方法，所述的调节柑橘脂肪酸不饱和度的抗旱菌剂的制备方法包括以下步骤：

1）、采集橘园土壤表面10cm以下的土壤，风干碾碎成粉末状后，经4mm口径的网晒过滤除杂，以将土壤中的石子筛除；然后通过灭菌装置在121℃和0.11 Mpa条件下灭菌1-1.5小时，制得灭菌土；

2）、在灭菌土中，以灭菌土和摩西斗管囊霉菌剂重量比7:3的比例，加入摩西斗管囊霉菌剂并混匀，得摩西斗管囊霉菌剂混合土壤，随后将摩西斗管囊霉菌剂混合土壤装入19.5×14×21cm的塑料盆；并保持摩西斗管囊霉菌剂混合土壤表面与塑料盆沿口有3—5cm的落差；

3）、将白三叶种子用清水清洗表面灰尘后，加入到浓度为95%的乙醇中浸泡5分钟，以去除白三叶种子上的部分细菌；然后取出种子再放入浓度为0.525%的次氯酸钠溶液中浸泡5分钟用以去除白三叶种子上剩余的细菌；随后用无菌水对白三叶种子冲洗3-5分钟，以去除其表面残留的乙醇和次氯酸钠；从而制得灭菌处理的白三叶种子；

4）、在塑料盆中以0.1-0.3g/cm²的密度在摩西斗管囊霉菌剂混合土壤的表面，均匀散入灭菌处理的白三叶种子，而后在其表面覆盖一层1mm厚度的灭菌土，并在塑料盆中浇透水；

5）、将步骤4）中的塑料盆放置在植物生长室中，并将植物生长室环境设置为白天16小时，夜晚8小时；白天温度为28℃，夜晚温度为18℃；湿度控制在60~70%之间，让白三叶种子进行萌发并生长；

6）、白三叶种子在植物生长室中正常生长3个月后，即，植株高度达到10-20cm后，紧贴土壤表面割除白三叶植株的地上部分，只留取地下根系，然后将塑料盆翻覆，整体倒出塑料盆中的土壤并摘出白三叶的根系；

7）、将摘出的白三叶根系剪切成0.5—1cm长度的短节，然后与塑料盆中倒出的土壤混合充分，得抗旱菌剂成品；

其特征在于：所述的抗旱菌剂在大田中的具体应用方法如下：在柑橘植株正投影的紧挨树冠外沿部分挖掘一圈20-30cm宽的环槽，并使柑橘植株的根系显露出来；而后将抗旱菌剂均匀撒入环槽；抗旱菌剂铺设厚度为0.5—1cm，随后将挖出的土壤回填，并在土壤回填中均匀撒上白三叶种子，而后浇透水让其自然生长即可；

该抗旱菌剂是白三叶的根、土壤和摩西斗管囊霉菌剂的混合物;土壤中摩西斗管囊霉菌剂的摩西斗管囊霉菌体中孢子在适宜的土壤条件下萌发成菌丝；萌发的菌丝会附着并共生于萌发后白三叶根系中，在白三叶根系信号物质的诱导下，菌丝自身分支，然后与根系表皮或根毛接触,形成一个向外突起的类似附着胞结构；随后菌丝进入到根细胞，白三叶提供其菌丝生长发育需要的营养物质，进而促进的摩西斗管囊霉孢子萌发和繁殖更多的摩西斗管囊霉菌丝；

摩西斗管囊霉菌丝的存在能够扩大根系吸收水分的范围；且摩西斗管囊霉菌丝能够分泌一种球囊霉素，它能够增加土壤的团粒结构，使土壤更加透气保水；

此外摩西斗管囊霉菌丝与柑橘根系接触后，形成一个向外突起的类似附着胞结构；菌丝进入到柑橘根细胞的内部，可以调节柑橘脂肪酸去饱和酶基因的表达，从而增加柑橘根系中脂肪酸的不饱和度，增加抗旱性。

2.根据权利要求1所述的一种调节柑橘脂肪酸不饱和度抗旱菌剂的应用方法，其特征在于：所述的抗旱菌剂在盆栽中的施用方法：

1）、将风干碾碎后的土壤经4mm-6mm目筛除杂，以去除土壤中的石粒、枯枝后，制得除杂土；

2）、在除杂土中，以除杂土与细沙体积比3:1的比例加入细沙，混合均匀后制得培养基质；

3）、取一株5叶龄的柑橘幼苗，并在盆栽容器中铺一层培养基质后再铺一层抗旱菌剂；培养基质的厚度和抗旱菌剂的厚度与柑橘幼苗整个根部高度的一半相等；然后人工将柑橘幼苗呈竖直状悬放在盆栽容器的中心，并使其下端根部与抗旱菌剂接触；随后依次铺设一层培养基质、一层抗旱菌剂和一层培养基质；铺设的培养基质的厚度与底层培养基质的厚度相等；铺设的抗旱菌剂厚度与先期铺设的抗旱菌剂厚度的比值为2:1；然后采用干浇透的浇水原则进行管理栽培即可制得盆栽植株。

3.根据权利要求2所述的一种调节柑橘脂肪酸不饱和度抗旱菌剂的应用方法，其特征在于：所述的摩西斗管囊霉菌剂由中国丛枝菌根真菌种质资源库提供。