[发明专利]一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒

说明书

本发明提供一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒，属于生化检测技术领域，激活剂为烟酸铬，测定试剂包括防腐剂、缓冲液、肌酸激酶及其同工酶活性测定抗体中的一种或多种，试剂盒包括含烟酸铬的第一试剂和第二试剂。本发明提供的激活剂稳定性好，不易被氧化失活，用于肌酸激酶及其同工酶活性测定的试剂及其试剂盒时，不需加入螯合剂，同时能够显著延长试剂的使用期限，能够保证试剂在长期保存后测定的准确性，该激活剂、测定试剂及试剂盒可用于全自动生化分析仪检测，操作简便。

技术领域

本发明属于生化检测技术领域，具体涉及一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒。

背景技术

肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)与细胞能量运转、肌肉收缩、ATP再生有重要关系。主要存在于人体骨骼肌、心肌、平滑肌，其次是脑组织，在胃肠道、肺和肾中的含量最少。肌酸激酶同工酶(Creatine Kinase Isoenzymes)是CK的四种亚基组合：肌肉型(CK-MM)、脑型(CK-BB)、杂化型(CK-MB)和线粒体型(CK-MiMi)。CK-MM主要存在于各种肌肉细胞中，CK-BB主要存在于脑细胞中，CK-MB主要存在于心肌细胞中，CK-MiMi主要存在于心肌和骨骼肌线粒体中。CK及其同工酶(主要为CK、CK-MB)在临床诊断中有十分重要的意义，其活性的测定可用于骨骼肌疾病、心肌疾病等的诊断。

CK的测定方法包括质量法、酶法(比色法)、电泳法(琼脂糖凝胶电泳、等电聚焦)、酶联免疫法(免疫抑制法)、色谱法。CK同工酶的测定方法包括电泳法、离子交换柱层析法、免疫抑制法、金标记法、免疫酶标法、放射免疫法。

CK酶法的测定原理是：CK+ADP→肌酸+ATP；ATP+葡萄糖+己糖激酶→葡萄糖-6-磷酸；葡萄糖-6-磷酸+葡萄糖-6-磷酸脱氢酶+NADP→NADPH+6-磷酸-葡萄糖酸盐；NADPH在340nm处有特异性吸光度，可通过测定NADPH的生成速率测定CK活性。CK-MB免疫抑制法的测定原理是：在健康人血清中，CK几乎是CK-MM(约占94％以上)，CK-MB约占5％以下，在试剂中加入抑制CK-M的抗体，该抗体能够完全抑制CK-M的活性，而不影响CK-B的活性，随后按照测定CK的方法测定，所得结果乘以2即为CK-MB的活性。

CK及其同工酶在血液中会钝化，该类酶的活性测定需提前加入激活剂。目前主要的激活剂是含巯基基团的化合物，巯基基团在保存过程中易被氧气或金属离子氧化，导致测定试剂在长期保存过程中准确性变差，进而影响试剂的应用。

发明内容

本发明的目的是提供一种肌酸激酶及其同工酶激活剂、测定试剂及试剂盒，该激活剂稳定性好，不易被氧化失活，用于肌酸激酶及其同工酶活性测定的试剂及其试剂盒时，不需加入螯合剂，同时能够显著延长试剂的使用期限，能够保证试剂在长期保存后测定的准确性，该激活剂、测定试剂及试剂盒可用于全自动生化分析仪检测，操作简便。

本发明提供了如下的技术方案：

一种肌酸激酶及其同工酶激活剂，激活剂为烟酸铬。

优选的，所述激活剂烟酸铬的使用浓度为0.01-0.05％(v/v)。

优选的，所述激活剂烟酸铬适用于细胞质中的CK、CK-MB、CK-MM、CK-BB的测定，也适用于线粒体中CK的测定。

一种肌酸激酶及其同工酶测定试剂，包括激活剂烟酸铬、防腐剂、缓冲液、肌酸激酶及其同工酶活性测定抗体中的一种或多种。

优选的，所述防腐剂为叠氮钠、庆大霉素、Proclin系列、KroVin系列中的至少一种，所述防腐剂的浓度为1-15g/L。

优选的，所述缓冲液为咪唑缓冲液、磷酸缓冲液、柠檬酸缓冲液、琥珀酸缓冲液、硼酸缓冲液中的至少一种，所述缓冲液的浓度为50-100mmol/L。