[发明专利]液相法检测药物制剂中吐温含量的方法

说明书

本发明涉及一种新的准确、快速、可靠和高灵敏度的检测药物制剂中吐温含量的液相检测方法，采用体积排阻色谱柱，示差折光为检测器。该方法适用性高，在宽泛的色谱条件下，本发明的SEC‑HPLC‑RI液相法均可以良好的分离吐温，且适用于各类样品的检测，为吐温限度检测提供了一种适用性好、色谱条件简单易得、灵敏度高的液相方法。

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种吐温含量的液相检测方法。

背景技术

吐温又名聚山梨酯，是一系列聚氧乙烯去水山梨醇的部分脂肪酸酯，有异臭、微苦。在药物制剂中通常作为辅料添加，以改善有效成分的溶解性；同是还可以抑制大分子蛋白药物的聚合，提高稳定性。随着近年来国内外研究的深入和一系列不良事件的披露，如多西他赛注射液和鱼腥草注射液事件，发现山梨酯类可能会引起过敏等不良反应，它能诱导细胞产生脱颗粒作用，引起过敏活性物质的释放，其本身的不饱和脂肪酸也十分容易氧化降解而产生多种有毒有害物质。因此，为确保药物使用安全，检测其中吐温含量显得尤为重要。

目前现有的聚山梨酯类检测方法主要有：分光光度法、水解法、液相色谱-质谱联用法、液相色谱-蒸发光散射法，其中分光光度法和水解法操作繁琐、灵敏度差，而且大部分方法均用于聚山梨酯80的检测，曲佳等人报道中，采用分子排阻-蒸发光散射(SEC-ELSD)法测定中药注射液中吐温80的含量，其检测限为10μg，灵敏度较低，难以满足含量较低的残留检测需求。朱文漓等人公开了反相高效液相色谱法联用蒸发光散射检测器测定康柏西普眼用注射液中辅料吐温20的分析方法，但对反相柱要求较高，对样品有较多的限制，如检测大分子蛋白药物，需使用孔径较大的反相柱，否则容易堵塞柱子。

综上所述，建立一种准确、快速、可靠和适用性广的检测药物制剂中吐温含量的液相方法显得尤为迫切和重要。

发明内容

本发明目的在于提供了一种新的准确、快速、可靠和高灵敏度的检测药物制剂中吐温含量的液相检测方法。

本发明提供的液相法检测吐温含量的方法，采用体积排阻色谱柱，示差折光检测器。

所述体积排阻色谱柱的孔径选择与蛋白药物及吐温的分子量有关，以能够较好将蛋白药物和吐温分离为准。本领域技术人员根据蛋白药物及吐温的分子量，通过常规技术手段可以筛选出适合的色谱柱孔径。

所述吐温是一系列聚氧乙烯去水山梨醇的部分脂肪酸酯，包括但不限于吐温20、吐温40、吐温60、吐温80等。

作为优选，以磷酸盐缓冲液为流动相。

作为优选，流动相pH值为6.0-8.0。

作为优选，柱温及流通池温度为30℃-40℃。

本发明液相法检测吐温含量方法，具体描述如下：采用体积排阻色谱柱(SEC)，以磷酸盐缓冲液为流动相，示差折光作为检测器；配制吐温的标准品溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，绘制吐温的标准曲线；供试品按照相同的检测条件进行检测，根据标准曲线计算供试品中吐温的含量。

本发明在SEC的分离原理和示差折光检测器的基础上(即SEC-HPLC-RI)，优化了吐温含量检测方法的色谱分离条件，发现该方法适用性高。在多种磷酸盐缓冲液的流动相条件下，在不同孔径的SEC色谱柱下，以及不同温度条件下等较宽泛的色谱条件下，SEC-HPLC-RI液相法均可以良好的分离吐温，且适用于各类样品的检测。为吐温含量检测提供了一种适用性好、色谱条件简单易得、灵敏度高的液相方法。

附图说明

图1实施例1不同pH值的磷酸缓冲液流动相下吐温-20的出峰情况

图2实施例1不同盐添加剂的流动相下吐温-20的出峰情况

图3实施例1不同柱温流通池温度下吐温-20的出峰情况

图4实施例1不同孔径的SEC色谱柱下吐温-20的出峰情况