[发明专利]一组打破烟草TMV抗性基因N下游（3’端）连锁累赘的分子标记及其应用

权利要求书

1.一组用于确定烟草TMV抗性基因N下游3’端连锁打破程度及位置信息的分子标记，其特征在于，所述分子标记编号为TMn324、TMn330、TMn332、TMn349、TMn359、TMn360和TMn383，其PCR扩增产物核苷酸序列分别为SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ ID No.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5和SEQ ID No.6、SEQ ID No.7和SEQ ID No.8、SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示；所述分子标记所对应的7个位点的引物序列分别为：

TMn324序列为TMn324F：5’- CGACTTCATGAAAGCACCAG -3’，如SEQ ID No.11所示，TMn324R：5’- CTACTGGACTCCACCCACGA -3’，如SEQ ID No.12所示；

TMn330序列为TMn330F：5’- TGGTTAAAACTCCCATCCCTA -3’，如SEQ ID No.13所示，TMn330R：5’- TGGAAAATGAATTTTTCGAATG -3’，如SEQ ID No.14所示；

TMn332序列为TMn332F：5’- TTTGTGCCAAAAGAAAAGGAA -3’，如SEQ ID No.15所示，TMn332R：5’- TGGAGAGATCGTGAAGGTCA -3’ ，如SEQ ID No.16所示；

TMn349序列为TMn349F：5’- TGCACGTCTGATACTTTTTGA -3’，如SEQ ID No.17所示，TMn349R：5’- CAACTTTGCACCACCATCAC -3’ ，如SEQ ID No.18所示；

TMn359序列为TMn359F：5’- CAACACGCACCATCACAAGT -3’，如SEQ ID No.19所示，TMn359R：5’- CTATGCTGCCCCTTCTTCAC -3’，如SEQ ID No.20所示；

TMn360序列为TMn360F：5’- TGGTTAAAGCATGCGACTTG -3’，如SEQ ID No.21所示，TMn360R：5’- AGGAGTTTTTCGGCGATTG -3’，如SEQ ID No.22所示；

TMn383序列为TMn383F：5’- TTTACGCCCTCACAAAAACC -3’，如SEQ ID No.23所示，TMn383R：5’- GATTTCACCGTCGGGACTAA -3’，如SEQ ID No.24所示。

2.一种根据权利要求1中所述分子标记的应用，其特征在于，利用所述分子标记进行精确检测和判断待测烟草中N基因下游3’端连锁累赘打破程度及具体位置信息；以TMn324、TMn330、TMn332、TMn349、TMn359、TMn360和TMn383共7引物分别扩增待检测烟草基因组DNA，检测PCR扩增产物核酸序列，如果PCR扩增产物中含有如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2、SEQ IDNo.3、SEQ ID No.4、SEQ ID No.5、SEQ ID No.7、SEQ ID No.9所示的全部7个序列即为在N基因下游3’端存在完全连锁累赘；如若上述7个PCR扩增产物序列均不存在，则为在N基因下游3’端的连锁累赘完全被打破；如若上述7个PCR扩增产物序列仅有部分存在，则表示在N基因下游3’端的连锁累赘部分被打破，即，有PCR扩增产物序列存在的位置处，连锁累赘未被打破，没有PCR扩增产物序列的位置处，连锁累赘完全被打破；此外，如若仅有SEQ ID No.6、SEQ ID No.8、SEQ ID No.10三条序列存在，其余序列均不存在，则同样表明N基因下游3’端的连锁累赘完全被打破；如若PCR扩增产物中含有SEQ ID No.5和SEQ ID No.6、SEQ IDNo.7和SEQ ID No.8、SEQ ID No.9和SEQ ID No.10所示的两两序列组合中任何一个组合存在，则表明在N基因下游3’端存在部分的连锁累赘，即，上述有两个PCR扩增产物序列以组合形式存在的位置处，连锁累赘部分被打破，具体的信息见表1：

表1 公开的7对引物PCR扩增产物核苷酸序列信息及其在烟草N基因下游3’端打破连锁累赘的位置信息

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