[发明专利]一种NSE检测试纸条的制备方法、试纸条、检测卡及NSE检测试剂盒

说明书

本发明涉及免疫层析技术领域，具体涉及一种NSE检测试纸条的制备方法以及按照该方法制备得到的试纸条、检测卡和NSE检测试剂盒。该NSE检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接设置在所述底板上，其中，所述结合垫上固定有NSE抗体‑荧光微球复合物，所述硝酸纤维素膜上设有检测线T线和质控线C线，所述C线设置在靠近所述吸水垫的一端；所述T线处包被有抗NSE单克隆抗体，所述C线处包被有羊抗鼠IGg多克隆抗体。该NSE检测试纸条用于检测NSE检测速度快，无需依赖大型医疗设备。

技术领域

本发明属于免疫层析检测技术领域，具体涉及一种NSE检测试纸条的制备方法、试纸条、检测卡及NSE检测试剂盒。

背景技术

小细胞肺癌(small cell lung cancer，SCLC)是肺癌的一种特殊类型，属于恶性程度极高的神经内分泌肿瘤，小细胞肺癌具有倍增时间短、增殖指数高和早期扩散等特点。小细胞肺癌生长迅速，易出现在大气道，刺激支气管黏膜，阻塞气道，临床症状以刺激性干咳最多见，首发症状包括咳嗽、咳痰、发热、胸闷、气短、胸痛及肺外症状。中心型肺癌出现呼吸道症状和体征较周围型早且明显，周围型肺癌除累及纵隔、胸膜或胸壁时出现胸痛外，一般早期无明显临床症状。当前的检测手段有肿瘤VIP受体显像、胸部普通X线检查、核磁共振成像(MRI)、正电子发射计算机体层扫描(PET)等大型且在大型医院应用的设备仪器，价格昂贵，无法下沉到基层社区进行有效的检测，而当前市场上检测试剂以胶体金和ELISA等方法为主，而成本较高，对仪器设备有特殊要求，操作繁琐，不便于床旁检测。因此，迫切需要建立一种适合基层对小细胞肺癌的快速检测试剂。

目前许多医院检测NSE小细胞肺癌标志物主要采用大型生化仪，其优点主要是测量精确，但存在测量时间慢；用血量多；操作复杂，只有受过专业培训的人才能操作；机器价格昂贵，只有部分医院才有配备，使其应用受到限制。近年来，POCT检测技术发展迅速，成为一项新型检验技术。其中荧光免疫层析技术以其独特的性能正在为临床实验室所接受，与传统方法相比，它具有操作简单、速度快、污染少、结果稳定准确；可以采用微创末梢(手指、耳垂)采血，减少抽血量；还可能缩短病人住院时间，节省住院费用等诸多优点。

时间分辨荧光免疫分析法是一种新型的检测手段，利用稀土离子作为示踪物标记蛋白质、多肽、激素、抗体、核酸探针或生物活性细胞，与其螯合剂、增强液在待反应体系(如：抗原抗体免疫反应、生物素亲和素反应、核酸探针杂交反应、靶细胞与效应细胞的杀伤反应等)发生特异性亲和反应后，用时间分辨荧光分析仪测定最后产物中的荧光强度，根据荧光强度和相对荧光强度比值，推测反应体系中分析物的浓度，达到定量分析的目的。相较于其他免疫检测技术，可极大地提高灵敏度，并获得较为宽阔的线性范围，实现现场快速定量检测，成为目前国内外研究的新热点。而针对NSE，利用时间分辨荧光免疫分析法对其进行定量检测的相关技术和检测工具尚未见报道。

发明内容

本发明提供一种NSE检测试纸条的制备方法、以及根据该NSE检测试纸条的制备方法制得的试纸条、检测卡和试剂盒，以更高效、便捷的实现对NSE的检测。

本发明的NSE检测试纸条的制备方法采用如下技术方案：一种NSE检测试纸条的制备方法，其特征在于,包括如下步骤：将样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接设置在所述底板上，其中，所述结合垫上固定有NSE抗体-荧光微球复合物，所述硝酸纤维素膜上设有检测线T线和质控线C线，所述C线设置在靠近所述吸水垫的一端；所述T线处包被有抗NSE单克隆抗体，所述C线处包被有羊抗鼠IGg多克隆抗体。为了使按照本发明的方法制备得到的试纸条的效果更好，所述抗NSE单克隆抗体的浓度大于0.5mg/ml，最优选1mg/ml；所述羊抗鼠IGg多克隆抗体的浓度为优选0.5-2mg/ml，最优选1mg/ml。