[发明专利]猫血清淀粉样蛋白A及其单克隆抗体的制备方法和应用在审
| 申请号： | 201811384920.2 | 申请日： | 2018-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN109517050A | 公开（公告）日： | 2019-03-26 |
| 发明（设计）人： | 刘清泉;胡祥叶;朱伟;项美华;武戌青;王立童;吴琼杉;余铭恩 | 申请（专利权）人： | 杭州贤至生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/47 | 分类号： | C07K14/47;C12N15/70;C12N1/21;C07K16/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京天奇智新知识产权代理有限公司 11340 | 代理人： | 朱海江 |
| 地址： | 311100 浙江省杭州市余杭*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组蛋白 血清淀粉样蛋白A 单克隆抗体 核苷酸序列 大肠杆菌偏爱密码子 生物工程技术领域 纯化单克隆抗体 制备方法和应用 优势抗原表位 原核表达系统 杂交瘤细胞株 重组表达载体 氨基酸序列 感染性炎症 化学合成 细胞融合 早期诊断 铕离子 单抗 多轮 构建 可用 正交 配对 制备 筛选 转换 | ||
【权利要求书】：
1.一种重组蛋白，其特征在于该重组蛋白具有如序列表SEQ ID No:1所示的氨基酸序列。
2.一种重组蛋白，其特征在于该重组蛋白包含如序列表SEQ ID No:2和SEQ ID No:3所示的氨基酸序列。
3.一种核苷酸序列，其特征在于该核苷酸序列如序列表SEQ ID No:4所示，可编码权利要求1-2所述的重组蛋白。
4.一种质粒载体，其特征在于该质粒载体含有权利要求3所述的核苷酸序列。
5.一种采用权利要求4所述质粒载体转化的菌株。
6.根据权利要求1-2所述的重组蛋白，其特征在于可用于猫血清淀粉样蛋白A单克隆抗体的制备，包括：
(a)合成权利要求3所述的核苷酸序列，并连接质粒载体，构建重组猫血清淀粉样蛋白A表达载体；
(b)将步骤(a)中的重组猫血清淀粉样蛋白A表达载体转化大肠杆菌，筛选得到重组猫血清淀粉样蛋白A表达菌株；
(c)大规模培养重组猫血清淀粉样蛋白A表达菌株后，经纯化获取重组猫血清淀粉样蛋白A；
(d)重组猫血清淀粉样蛋白A多次免疫Balb/c小鼠后，取其脾脏细胞与sp2/0骨髓瘤细胞融合，经过多轮筛选得到杂交瘤细胞株；
(e)纯化单抗并分别标记铕离子(Eu3+)，通过正交实验确定最佳单抗配对组合。
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