[发明专利]一种快速考马斯亮蓝染色液

说明书

本发明公开了一种快速考马斯亮蓝染色液。包含考马斯亮蓝，水，醇，酸和木寡糖。本发明不使用甲醇，不使用乙酸，更经济环保，并且与一般考马斯亮蓝染色相比提高了染色灵敏度；染色液中加入木寡糖，染色迅速，染色5分钟就能看到蛋白条带，灵敏度高，质谱兼容性好；染色后不需要脱色，仅用蒸馏水简单漂洗即可观察，操作简便，效率高。

技术领域

本发明属于蛋白凝胶电泳技术领域，具体涉及一种能在5-12分钟时间完成蛋白染色的考马斯亮蓝染色液。

背景技术

凝胶电泳技术是目前蛋白质组学研究中使用范围最广泛的蛋白质分离技术。电泳结束后，要通过染色技术观察蛋白条带和含量。当前有多种蛋白染色方法，主要分为以下4种： 有机染料染色、负染、银染以及荧光染料染色。其中，有机试剂染色以考马斯亮蓝染色法最为常用。 此方法 1963 年Fazekas首次应用到醋酸纤维素片上的蛋白染色，随后Meyer 等使用甲醇、乙酸和水的溶液配制 CBB R-250 染色液进行聚丙烯酰胺凝胶中的蛋白染色。由于CBB染色法简单易用，价格低廉，且与下游的蛋白质谱分析高度兼容，已经成为目前使用最广泛的染色方法。然而，此方法的缺点如下：第一 染色灵敏度不高，对低丰度蛋白质的显现较差。第二 CBB染色后，凝胶有比较深的颜色背景，需要较长时间的脱色，影响实验效率。第三 由于使用甲醇和冰乙酸等有毒或有刺激性气味试剂，对操作者的身体有害，目前已经有改进的方案，醇采用乙醇，酸采用磷酸或硫酸。负染法在凝胶染色中只染背景，不染蛋白，能够保持蛋白的完整性，具有灵敏度高，与质谱兼容性良好等优点，但线性范围差，不适合蛋白定量分析。银染具有灵敏度的优点，但操作繁琐。荧光染色灵敏度高，但荧光染料价格昂贵，染色成本高。

因此，蛋白染色领域中需要一种可以显著增加蛋白染色灵敏度、染色环保、价格低廉且与质谱兼容的染色液。除了染色灵敏度及环保的问题，本领域技术人员普遍还存在的问题是染色，脱色时间问题，染色时间通常要达到30min以上，才能达到较好的实验结果，目前，有采用加入可溶性淀粉的技术方案，如专利CN104004382B公开的一种考马斯亮蓝染色液和染色方法，虽然能缩短染色时间，但是，只能缩短至20分钟，还不能达到实验快速化的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种快速考马斯亮蓝染色液。

一种快速考马斯亮蓝染色液，包含考马斯亮蓝，水，醇，酸和木寡糖。

所述考马斯亮蓝染色液中考马斯亮蓝的浓度为0.3-2g/L。

所述考马斯亮蓝选自考马斯亮蓝R250或考马斯亮蓝G250。

所述醇为乙醇或异丙醇，体积百分比为3-10%。

所述酸为磷酸或盐酸，体积百分比为1-8%。

所述考马斯亮蓝染色液中木寡糖的浓度为10-50g/L。

本发明的有益效果：本发明不使用甲醇，不使用乙酸，更经济环保，并且与一般考马斯亮蓝染色相比提高了染色灵敏度；染色液中加入木寡糖，染色迅速，染色5分钟就能看到蛋白条带，灵敏度高，质谱兼容性好；本发明的染色法染色后不需要脱色，仅用蒸馏水简单漂洗即可观察，操作简便，效率高。

附图说明

图1为不同质量的牛血清白蛋白 BSA 染色5分钟结果图。

图2为不同质量的牛血清白蛋白 BSA 染色8分钟结果图。

图3为不同质量的牛血清白蛋白 BSA 染色12分钟结果图。

图4为不同质量的牛血清白蛋白 BSA 脱色后结果图。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。

实验例：