[发明专利]一种特异性结合Taq酶的核酸适配体及其筛选方法、应用

说明书

本发明公开了一种特异性结合Taq酶的核酸适配体，所述核酸适配体序列至少含有A序列、B序列中的一种。本发明还公开了上述特异性结合Taq酶的核酸适配体的筛选方法，如SEQ ID No.1、SEQ ID No.2所示的DNA序列的筛选方法包括如下步骤：以Taq酶为靶标物质，经磁珠筛选和SPR‑SELEX筛选交替筛选得到。本发明还公开了一种核酸适配体衍生物，所述核酸适配体衍生物是由上述核酸适配体序列的骨架衍生出的硫代磷酸酯骨架序列，或者是由上述核酸适配体改造成的肽核酸。本发明还公开了上述核酸适配体或上述核酸适配体衍生物在抑制Taq酶活性中的应用。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种特异性结合Taq酶的核酸适配体及其筛选方法、应用。

背景技术

Taq DNA聚合酶(Thermusaquaticus DNA polymerase)，简称Taq酶，是从水生栖热菌中分离出的具有热稳定性的DNA聚合酶，此菌于1969年由Brock分离自美国黄石公园温泉，其生长温度为70-75℃，1985年，R.K.Saiki等将分离纯化后的Taq DNA聚合酶应用于PCR反应，对于PCR的应用有里程碑的意义。PCR循环包括变性(90℃左右)、退火(50℃左右)、延伸(70℃左右)，每一步对温度的要求都不一样，多数酶在高温时即变性失活，然而该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活，所以不需要每个循环加酶，使PCR技术变得非常简捷，得以大量应用，同时也大大降低了成本。现该酶广泛应用于疾病诊断与治疗、传染病检测、药物作用机理等医药领域。

Taq DNA聚合酶在75-80℃时活性最高，但是在温度较低时，Taq酶的活性依然存在，这就会使得在PCR反应的初始阶段，由于引物的量比模板的量高出很多，在仪器升温过程中，容易出现引物互搭或引物和模板会有一些非特异性配对的现象，在Taq DNA聚合酶的作用下延伸，形成引物二聚体和非特异性产物，这些非特异性产物又可作为模板在以后的PCR循环里继续扩增，这样非特异性产物不断扩增积累，就会严重干扰目的片段的扩增从而导致目的产物扩增效率低，甚至导致特异性条带不能扩出。

为了避免升温过程中产生引物二聚体和非特异性产物，根据PCR体系的反应特点及关键成分设计了多种方案以实现PCR的热启动。目前，应用最多的就是通过抗体修饰来实现Taq酶的热启动。在低温时，抗体与酶形成抗原-抗体复合物，Taq酶活性被封闭。当PCR反应温度大于70℃时，抗体变性从而与Taq酶分离，Taq酶活性得以释放，实现热启动PCR。但温度降低，抗体变性无法复性，不能实现抑制Taq酶活性作用。

用核酸适配体制备的热启动Taq酶与常规意义上的抗体结合的热启动酶有所不同，当温度升高时核酸适配体变性，与Taq酶解离，从而Taq酶可以发挥活性，当温度降低到约45℃，核酸适配体复性后可以重新与Taq酶结合，从而抑制它的活性，因此它的热启动并不仅仅是反应初始的升温阶段的热启动，而是整个PCR的每个循环中的热启动。核酸适配体与抗体相比稳定性更好，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程。

目前，在我国有关研究热启动DNA聚合酶的报道文章还不是很多，核酸适配体与Taq酶结合来制备热启动Taq酶的报道更少见。

发明内容

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种特异性结合Taq酶的核酸适配体及其筛选方法、应用，本发明可以与Taq酶特异性结合，抑制Taq酶的活性，且本发明筛选效率高。

本发明提出的一种特异性结合Taq酶的核酸适配体，所述核酸适配体序列至少含有A序列、B序列中的一种，其中，A序列包含以下四种序列中的至少一种：

1)、如SEQ IDNo.1所示的DNA序列；

2)、与SEQ ID No.1所示DNA序列具有60％以上同源性，且能够特异性结合Taq酶的DNA序列；

3)、在严格条件下与SEQ ID No.1所示DNA序列杂交的DNA序列；