[发明专利]一种排硫硫杆菌蛋白质双向电泳分析方法

权利要求书

1.一种排硫硫杆菌细胞蛋白的电泳分析方法，其具体步骤如下：

A.排硫硫杆菌细胞蛋白的提取

将冷冻保存的排硫硫杆菌培养物加入蛋白裂解液磁力搅拌得悬浮液，经超声破碎后的悬浮液，离心收集上清液，加入有机溶剂萃取，再离心得沉淀物，再加入水化液溶解，其中水化液中DTT浓度为15-25mM，测定并控制蛋白浓度为10-50μg/mL，提取的蛋白溶液样品冰箱保存备用；

B.SDS-PAGE凝胶的制备

用单体贮存液、分离胶溶液、SDS溶液、APS溶液和TEMED溶液按比例混合，制备质量体积分数为0.075-0.125g/ml SDS-PAGE凝胶；

C.双向凝胶电泳

用步骤A提取的蛋白溶液将胶条水化；将水化后的胶条安装到电泳仪中，先在100-200V条件下进行低压除盐，再调高电压至5000-7000V，进行第一向等电聚焦电泳；再将胶条平衡；将平衡后的胶条转移至步骤B配制好的SDS-PAGE凝胶的胶面上，进行第二向SDS-PAGE电泳；

D.染色处理及图像扫描

电泳完成后，凝胶使用染色剂染色，再进行图像扫描，用计算机软件分析图像，获取详细的蛋白样品信息。

2.根据权利要求1所述的电泳分析方法，其特征在于步骤A中所述的水化液组分为：8-10M尿素，1％-2％g/ml CHAPS，0.001-0.002％g/ml溴酚蓝，0.5-1％g/ml IPG缓冲液，15-20mM DTT。

3.根据权利要求1所述的电泳分析方法，其特征在于所述的排硫硫杆菌，菌种的拉丁学名为Thiobacillus thioparus，保藏日期是2016年7月11日，保藏中心登记入册编号是CGMCC No.12756。

4.根据权利要求1所述的电泳分析方法，其特征在于所述的胶条平衡采用两次平衡，第一次平衡在平衡液中加入DTT，其中平衡液中DTT的浓度为30-50mM；第二次平衡在平衡液中加入碘乙酰胺，其中平衡液中碘乙酰胺的浓度10-20mM。

5.根据权利要求1所述的电泳分析方法，其特征在于第二向SDS-PAGE电泳时控制电压500-800V，电流300-400mA，电泳时间10～12h。