[发明专利]一种脱细胞真皮基质材料的制备方法

说明书

本发明公开了一种脱细胞真皮基质材料的制备方法,其特点是将动物皮去肉去毛后取断层皮片，经脱脂、脱毛、病毒灭活、脱细胞、交联改性、清洗保湿、包装和辐照灭菌工艺得到的脱细胞真皮基质。本发明的特点：工艺时间短，清除抗原物质效果好，材料具有非常好的贴附性、保湿性和透气性等特点。

技术领域

本发明涉及一种脱细胞真皮基质材料的制备方法，属于生物医用材料制备领域。

背景技术

近二十年来，治疗皮肤缺损材料的研发进展很快，主要在于两个方向，一是个自体皮或异体捐献皮的处理，另一个是异种皮或器官的处理，包含了牛羊猪动物的皮、肌腱、内脏膜、肠粘膜等。在国内已有数家公司已经取得了相关的注册证并在实际临床使用，关于脱细胞真皮基质材料的制备，近年来也公开了相关发明专利，例如：

发明专利申请201710682043.6公开提供了一种脱细胞真皮基质的制备方法，其中包括以下步骤：灭毒断层皮片以脱脂剂脱脂后，经脱细胞液脱细胞，获得产生A；产物A以橄榄苦苷溶液交联后，依次经酒精漂洗、PBS溶液漂洗、干燥、辐照消毒，获得产物B；产物B以羧甲基壳聚糖溶液处理后，经水漂洗，获得产物C；产物C以戊二醛溶液浸泡后，经柔化、保湿处理、再以生理盐水漂洗、病毒灭活后，冻干制得脱细胞真皮基质。

发明专利申请20170323525.2公开了一种异种脱细胞真皮基质的制备方法，其特征包括以下步骤：(1)选用巴马香猪为皮源，对取皮区进行脱毛、消毒，用取皮机取下大张皮肤，无菌生理盐水清洗，皮鼓反取成0.25-0.5mm的断层皮片，采用激光打孔技术对断层皮片进行制孔，备用；(2)将步骤(1)制得的断层皮片浸泡于0.5-1.0％(m/v)的邻苯基苯酚钠水溶液中，处理6-8min，无菌生理盐水清洗3-4次，然后加入1-2％(m/v)三羟基甲基甲胺基乙磺酸水溶液，超声震撼处理6-12h，每2h更换一次溶液，其中加入的三羟基甲基甲胺基乙磺酸与断层皮片的重量比为10：1,得到去表皮的真皮；(3)将步骤(2)得到的去表皮的真皮置于0.2—0.4％TritonX-100(v/v)溶液中，室温下振荡洗涤6-12h，用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次，加入脱细胞处理液，在37℃条件下作用12-24h，所述的脱细胞处理液与去表皮的真皮的重量比为10：1，用含4000U/L庆大霉素生理盐水溶液洗涤3次，再用无菌生理盐水洗涤3-4次，得到脱细胞真皮；(4)将步骤(3)得到的脱细胞真皮放入转鼓中，然后分次加入温度为35℃、pH为5.7的羧甲基壳聚糖溶液，反应30min后调节pH值到5.0，再反应75min，调节pH值到6.8,处理完毕后放净废液，再将处理后的材料用无菌生理盐水洗涤2次，每次15分钟，洗后控干水，得到脱细胞真皮基质；(5)将步骤(4)处理得到的脱细胞真皮基质浸泡于体积浓度为0.1—0.3％(v/v)的戊二醛溶液中交联15-30min,无菌生理盐水冲洗10-15min，然后置于柔化剂溶液中浸泡30-60min，清洗后再放入保湿剂溶液中，37℃保温处理30-60min，最后用无菌生理盐水充分冲洗去除残留；(6)将经步骤(5)处理得到的脱细胞真皮基质放入冷冻干燥机的冷冻室内冻干后，成型包装，再经γ射线辐照消毒灭菌，即为成品。

发明专利申请201710247775.2披露了一种医用脱细胞真皮基质的制备方法，其特征在于，包括以下操作步骤：(1)将新鲜动物皮肤去肉后，依次进行消毒、清洗、高渗盐处理，撕去表皮，得待处理真皮皮片；(2)将步骤(1)制得的真皮皮片放入碱液和过氧化氢的混合溶液中浸泡3-24小时；(3)将步骤(2)处理后的真皮皮片进行裁切、剖层后浸泡在含有胰蛋白酶的溶液中，在35-40℃温度下，pH7-9，浸泡1-12小时；(4)将步骤(3)处理后的真皮皮片清洗后，冷冻存放，即完成。

上述的一些脱细胞真皮基质材料中，尚存在以下不足：

1.手工操作，劳动强度偏大；

2.脱脂、脱毛、病毒灭活、交联等工艺不全，产品可能带有脂肪和毛根；