[发明专利]一种制备脐带间充质干细胞的方法

说明书

本发明提供了一种制备脐带间充质干细胞的方法，包括以下步骤：S1、采集脐带样本；S2、去除脐带上皮组织，充分暴露内部的华通氏胶；S3、去除脐带动静脉，制取华通氏胶；S4、组织贴壁处理，将华通氏胶贴到细胞培养皿中；S5、置CO₂培养箱中培养，获得脐带间充质干细胞。由于采用了上述技术方案，与现有技术相比，本发明的优点是：本方法将脐带上皮细胞层去除，充分暴露富含脐带间充质干细胞的华通氏胶，剪成小块后无论怎么贴，都是新鲜粘稠的华通氏胶创面，操作简单，易贴壁，也有利于脐带间充质细胞爬出。

技术领域

本发明涉及细胞生物学领域。

具体地说，是涉及一种制备脐带间充质干细胞的方法。

背景技术

脐带间充质干细胞是来源于发育早期中胚层的一类具有高度自我更新能力和多向分化潜能的干细胞，可在体外分化成脂肪细胞、成骨细胞、心肌细胞、血管内皮细胞和表皮细胞等。脐带间充质干细胞因取材方便、无免疫排斥等优势而成为组织工程理想的种子来源。体外培养的间充质干细胞形态均一，平行生长或漩涡状生长，能够表达多种表面抗原，如高表达间质细胞标志(CD44、CD90、CD29)，不表达造血干细胞标志(CD34、CD45) 及人白细胞抗原(HLA-DR)等。

目前，脐带间充质干细胞的分离纯化技术存在易被产道菌污染及初次分离耗时太长等问题。常见脐带运输液及洗涤液多为含青链霉素，庆大霉素等抗生素的PBS缓冲液，由于抗生素的耐药菌株较多，抑菌效果不好，通常情况下会通过加大抗生素的量来提高抑菌效果，导致抗生素滥用；脐带间充质干细胞贴壁培养法分离原代细胞耗时长，组织块易脱落，有人提出用去除血管壁面贴壁法，可操作性较差，消化法跟先消化后贴壁法，细胞纯度低，而且对细胞多多少少都有一定的损伤。

发明内容

本发明的目的在于克服上述传统技术的不足之处，提供一种制备脐带间充质干细胞的方法，本方法提供的脐带运输液及洗涤液中添加了抗菌肽、匙羹藤和海藻糖，三者均为天然物质，即可有效降低细菌和真菌对细胞的污染又对人体有益无害。此外，将脐带上皮细胞层去除，可充分暴露富含间充质干细胞的华通氏胶，组织块更易贴壁，脐带间充质细胞爬出率更高。

本发明的目的是通过以下技术措施来达到的：

一种制备脐带间充质干细胞的方法，包括以下步骤：

S1、采集脐带样本；

S2、去除脐带上皮组织，充分暴露内部的华通氏胶；

S3、去除脐带动静脉，制取华通氏胶；

S4、组织贴壁处理，将华通氏胶贴到细胞培养皿中；

S5、置CO₂培养箱中培养，获得脐带间充质干细胞。

作为一种改进：步骤S1中，采集的脐带样本置于运输液中，所述运输液包括以下组分：

抗菌肽 5-20ug/ml；

匙羹藤 50-100ug/ml；

海藻糖 0.5-10mg/ml；

溶剂为PH6.8-7.6的PBS。

抗菌肽是一类具有抗菌活性的碱性多肽物质，具有热稳定性、广谱抗菌性，对细菌有很强的杀伤作用，对常见耐药性病原菌具有同样的抑制作用，对部分病毒、真菌、原虫和癌细胞等也有杀灭作用，不仅对人体无害，甚至能提高免疫力、加速伤口愈合过程。

匙羹藤是一种绿色植物，其中含有的匙羹藤酸可以有效抑制产道常见菌白色念珠菌的菌丝生长及其毒性，同样可以阻止曲霉菌属等真菌的生长，而且对金黄色葡萄球菌、变形杆菌及大肠杆菌等多种细菌也有明显抑制效果。