[发明专利]一种刺梨多糖功能化纳米硒复合物及其制备方法与在降糖药物中的应用

权利要求书

1.一种刺梨多糖功能化纳米硒复合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1) 将亚硒酸钠溶液与刺梨多糖溶液混合均匀，然后加入维生素C溶液，搅拌均匀后振荡反应；

(2) 将步骤（1）所得反应液透析，干燥，即得到刺梨多糖功能化纳米硒复合物；

所述刺梨多糖溶液的浓度为0.25-4 mg/L；

步骤（1）所述亚硒酸钠溶液的浓度为1~3 mM，所述维生素C溶液的浓度为6~10 mM；

步骤（1）所述亚硒酸钠溶液与刺梨多糖溶液的体积比为1:1~1:3；

步骤（1）所述反应的温度为37 °C；

步骤（1）所述刺梨多糖为RTFP-3，所述RTFP-3的制备包括以下步骤：

（a）将刺梨鲜果清洗后在60 °C鼓风干燥箱中干燥、粉碎、过60目筛得刺梨干粉，按照所述刺梨干粉和95%乙醇配成固液比为1:6 g/mL的混合液，在70 °C条件下加热回流4 h，过滤得到残留物，所述加热回流和过滤重复3次，得脱脂后的刺梨干粉；

（b）将步骤（a）所述脱脂后的刺梨干粉放入45 °C的鼓风干燥箱中干燥48 h；将干燥后的刺梨干粉150 g，加入蒸馏水进行热水浸提，浸提温度95°C，时间3 h，以干燥后的刺梨干粉的质量g和蒸馏水的体积ml计，所述干燥后的刺梨干粉的质量和蒸馏水的体积比为1:30，所述热水浸提的提取次数为2次；离心力5000 g，离心10 min，收集上清液于55°C下旋转蒸发浓缩至原体积的1/4，得到刺梨多糖的浓缩液；

（c）在步骤（b）所述刺梨多糖的浓缩液中加入Sevag试剂，所述Sevag试剂为氯仿：正丁醇=4:1，所述刺梨多糖的浓缩液与Sevag试剂的体积比为3:1，振荡30min，离心分离上层糖液，离心力5000 g，离心时间为10 min，振荡和离心过程重复操作12次以上，直至肉眼观察无蛋白残留，减压浓缩至原体积的1/3，得脱蛋白后的浓缩液；

（d）将步骤（c）所述脱蛋白后的浓缩液中加入大孔树脂AB-8，进行脱色处理，所述脱蛋白后的浓缩液与大孔树脂的体积比为6:1，温度37 °C，在摇床上振荡处理10 h，过滤得到滤液；脱色后的滤液中加入无水乙醇，使乙醇的体积浓度达到70%，4 °C下静置24 h，离心力5000 g，离心10 min得到下层的多糖沉淀，冷冻干燥48 h，得到水溶性刺梨粗多糖；

（e）将步骤（d）所述水溶性刺梨粗多糖用蒸馏水溶解，配制成终浓度为20 mg/mL的多糖溶液，上样于DEAE-Sepharose fast flow柱，上样量体积与柱体积比为1:4，用0.2 mol/L的NaCl溶液进行梯度洗脱，洗脱液流速为1.0 mL/min，每管收集5 mL；将收集后溶液浓缩透析48 h，然后进行真空冷冻干燥，得到纯化后的刺梨多糖RTFP-3。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述刺梨多糖溶液的浓度为0.25、0.5、1、2、3或4 mg/L。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述维生素C溶液的体积为亚硒酸钠溶液体积的5~10倍。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述反应是在100~300转每分钟条件下反应12~36 h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述透析是将步骤（1）所得反应液转移到透析袋中，在水中透析，透析液经过ICP-MS检测无硒离子后停止透析；所述透析的温度为2~8 °C；所述干燥是冷冻干燥，干燥的温度为-20~-50 °C。

6.由权利要求1-5任一项所述的制备方法制得的一种刺梨多糖功能化纳米硒复合物。

7.权利要求6所述的一种刺梨多糖功能化纳米硒复合物在制备降糖药物中的应用。