[发明专利]用于宫颈癌筛查的甲基化位点及其检测引物

说明书

本发明公开了一种用于宫颈癌筛查的甲基化位点，所述甲基化位点为CHRM2基因的cg24575234位点、CHAD基因的cg06818777位点、FGF10基因的cg08361126位点以及ITGA8基因的cg08976810位点，同时公开了检测宫颈癌样本基因甲基化水平的试剂盒所包括的引物对。本发明能做到全程自动化，结果客观，易于判读，避免了主观因素的影响；本发明检测筛查宫颈癌的特异性为100％，大于HPV基因检测法的特异性(80％)，阳性预测值从0.0474％提高为100％，筛查结果客观，易于判读。本发明还可与当前宫颈癌筛检实验进行并联使用，很大程度的节约检查成本，避免太多假阳性病人因阳性结果而造成经济损失和心理负担。

技术领域

本发明属于肿瘤筛查技术领域，尤其涉及一种用于宫颈癌筛查的甲基化位点及其检测引物。

背景技术

宫颈癌是最常见的女性肿瘤之一，其主要致病因素为人乳头瘤病毒(HumanPapillomavirus,HPV)，其虽然有防御性疫苗，但是在其大规模推广前，已经有很多女性超过了疫苗接种年龄，尤其在欠发达地区，疫苗的普及还需时日，而宫颈癌的发病率却居高不下，早诊断早治疗依然是防治宫颈癌的主要方法。

目前宫颈癌的早期筛查方法包括宫颈脱落细胞检查法和HPV基因检测法，但这两种筛选方法存在如下缺点：(1)宫颈脱落细胞检查法，该方法细胞学标本满意度差、异常细胞检出率低、依赖诊断者的经验、诊断者间结果重复性差、缺乏质量控制等；(2)HPV基因检测法，虽然HPV在人群中感染率高达20％，但是大多数的HPV感染是可以被机体自动清除的，只有很少部分持续感染高危型HPV(HR-HPV)才最终发展为宫颈癌，大多数HPV阳性的非宫颈癌患者承担一定的经济负担和精神压力，有过度医疗之嫌，因此需要寻找更符合临床需求的检测指标。

综上所述，现有的宫颈癌早期筛查技术存在的问题是：宫颈脱落细胞检查法检测结果客观性差，HPV基因检测法检测阳性预测值低。

发明内容

为解决上述背景技术中指出的问题，本发明提供一种用于宫颈癌筛查的甲基化位点及其检测引物，筛查结果客观，易于判读，检测引物对宫颈癌的特异性强，本发明与当前宫颈癌筛检实验进行并联使用时能很大程度的节约检查成本，避免太多假阳性病人因阳性结果而造成经济损失和心理负担。

由于甲基化是表观遗传学中最常见的DNA修饰方式，它在细胞生长、细胞分化、细胞增殖和疾病状态中起到了关键性的作用，尤其与癌症密切相关。因此，本发明是这样实现的，一种用于宫颈癌筛查的甲基化位点，所用宫颈癌样本为通过手术切除获得浸润性鳞状上皮宫颈癌组织保存的蜡块标本，采用DNA甲基化芯片检测宫颈癌样本的全基因组DNA甲基化水平，进行甲基化差异位点分析、基因本体论(GO)分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析，筛选出差异CpG位点，应用焦磷酸测序对筛选出的位点予以甲基化水平验证，再进行临床样本验证，对各位点甲基化做生存分析，得到阳性判断值。

所检测甲基化程度的甲基化位点为CHRM2基因的cg24575234位点、CHAD基因的cg06818777位点、FGF10基因的cg08361126位点以及ITGA8基因的cg08976810位点，将这些甲基化位点与阳性判断值相比，判断所检测的样本是否为宫颈癌，从而达到筛查宫颈癌的目的。

本发明进一步提供了一种检测宫颈癌样本基因甲基化水平的试剂盒，包括以下引物对：

(1)CHRM2基因的cg24575234位点：

F:ATAGGTTATAGATTAGTTAAGTGGTTGAGA，

R:AAAAAACCCACCCCAAAACTCTAAC；

(2)CHAD基因的cg06818777位点：

F:GAGAGAGGGAGGAGTTTTTTTAATTTATT，

R:CCTCCCATCCAAAACACCC；