[发明专利]一种快速定量检测BNP的微流控荧光免疫芯片

说明书

本发明涉及快速定量检测BNP的微流控荧光免疫芯片，可有效解决灵敏度低、重复性差、易受外界环境干扰，以及现有配套仪器昂贵、检测时间长的问题，底板为空心凹槽长方形，顶板置于底板凹槽的正上方，构成底板和顶板的密封结构，顶板的上平面有样品加样口和负压接口，底板的凹槽内经回形管装有串接在一起的样品加样区、血细胞过滤区、微栅反应腔、时间阀、识别反应区和废液池，血细胞过滤区上装有血细胞滤膜，样品加样口正对底板样品凹槽内的样品加样区，回形管的负压端接负压接口，微栅反应腔预封装有BNP检测抗体和质控抗体，构成样品与荧光标记的BNP单克隆抗体混合反应区；本发明结构简单，新颖独特，易生产制备，使用方便，准确率高，节能环保。

技术领域

本发明涉及医疗诊断设备，特别是一种快速定量检测BNP的微流控荧光免疫芯片。

背景技术

脑利尿钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)，又称B型利钠肽，具有32个氨基酸，分子量为4千道尔顿(4kDa)的氨基酸序列。当心室容积扩张和压力负荷增加时，心室肌细胞合成并分泌由108个氨基酸分子形成的BNP的前体，即前体BNP(Pro-BNP)，其后被水解成，形成无活性的带有氮末端的76个氨基酸(NT-proBNP)，和有活性的32-氨基酸，即BNP。

BNP主要参与尿钠肽系统功能，包括调节血压和体液平衡(Bonow，R.O.，Circulation93:1946-1950，1996)。相关试验已经证实，人类的血清/血浆/全血中，可以检测到NT-pro-BNP，BNP，和BNP前体以及它们的一些混合片段(Tateyama et ah，Biochem.Biophys.Res.Commun.185:760-7,1992；Hunt et ah,Biochem.Biophys.Res.Commun.214:1175-83,1995)。含有108个氨基酸的pro-BNP序列如下。其中pro-BNP和BNP的第一位置的2个残基可以通过水解或蛋白水解去掉，从BNP的前体(pro-BNP)生成BNP3-108分子，从NT-pro-BNP生成BNP3-76分子，从BNP生成BNP79-108分子。

心肌细胞分泌的pro-BNP，含有108个氨基酸的序列如下，下画线部分为有活性的BNP(BNP77-108)序列：

HPLGSPGSAS DLETSGLQEQ RNHLQGKLSE LQVEQTSLEP LQESPRPTGV 50 WKSREVATEGIRGHRKMVLY TLRAPRSPKM VQGSGCFGRK MDRISSSSGL 100 GCKVLRRH 108

pro-BNP(BNP1-108)是由更大的前体pre-pro-BNP形成，该前体的序列如下(“前体”的特殊序列为粗体字母表示)：

免疫检测和诊断相关疾病，可以通过构建并产生这些序列的特异性抗体，从而特异性结合上述不同BNP序列的多肽，继而确认并定量检测BNP的浓度。测定BNP的临床意义主要有：急性呼吸困难的鉴别诊断，心源性猝死预测，心力衰竭病人的危险分层及监测心力衰竭的治疗，同时，可以提示心力衰竭的预后。在2001年修订的欧洲心脏病学会(ESC)心衰诊疗指南中，已经把脑钠肽作为心衰诊断的工具。2005年欧洲和美国心衰诊疗指南，都进一步肯定了脑钠肽在心衰诊断中的作用，可以作为一个更好的预示心衰状况的指标。我国2007年《慢性心力衰竭诊断治疗指南》和2010年《急性性心力衰竭诊断治疗指南》也推荐将BNP用于心衰的诊断和预后判断。