[发明专利]一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法在审
| 申请号： | 201811360010.0 | 申请日： | 2018-11-15 |
| 公开（公告）号： | CN109468258A | 公开（公告）日： | 2019-03-15 |
| 发明（设计）人： | 葛蔚;柴超;张勇;王忠;唐超;张文丽;王清吉;林英庭 | 申请（专利权）人： | 青岛农业大学 |
| 主分类号： | C12N1/36 | 分类号： | C12N1/36;C12N1/20;A23K10/12;A23K10/30 |
| 代理公司： | 北京汇捷知识产权代理事务所(普通合伙) 11531 | 代理人： | 李宏伟 |
| 地址： | 266109 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 丙酸钠 丙酸盐 瘤胃 耐受 细菌驯化 发酵 固体培养基 无机盐培养 避光培养 恒温摇床 划线分离 饲料营养 细菌菌株 驯化 瘤胃液 目标菌 降解 菌液 菌株 接种 秸秆 污染物 牧草 筛选 饲料 应用 | ||
1.一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，其特征在于：取瘤胃液，加入丙酸钠和无机盐培养基于恒温摇床，避光培养，逐渐改变丙酸钠浓度，逐次接种，完成不同浓度的丙酸钠条件下培养，将所获得的菌液在固体培养基上划线分离得到目标菌。
2.按照权利要求1所述一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，其特征在于：取5ml的瘤胃液于100ml三角瓶中，加入0.1-1％的丙酸钠和40ml的无机盐培养基于恒温摇床120-150rpm，30-39℃下避光培养，2-5天后观察菌种生长情况；逐渐改变丙酸钠浓度，逐次接种，完成不同浓度的丙酸钠条件下培养1周为1个轮次，完成3-5轮次的培养；将所获得的菌液在固体培养基上划线分离得到目标菌。
3.按照权利要求1所述一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，其特征在于：所述丙酸钠浓度为0.25％、0.5％、0.75％、1.0％，进行4个轮次的培养，培养条件为恒温摇床150rpm，35℃下避光培养。
4.按照权利要求1所述一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，其特征在于：所述无机盐培养基各种盐浓度为：MnSO4 0.02-0.05mg/L、ZnSO4 0.02-0.05mg/L、(NH4)2MoO4 0.02-0.05mg/L、FeCl3 0.1-0.4mg/L、CaCl2 20-50mg/L、MgSO4 50-80mg/L、K2HPO4 90-120mg/L、Na2HPO4 100-160mg/L、KH2PO4 30-50mg/L、NH4Cl15-50mg/L。
5.按照权利要求1所述一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，其特征在于：前期取目标菌在含有0.1-1％的丙酸钠无机盐培养基接种摇瓶培养，逐渐提高丙酸钠浓度到1％；后期使用1-5％的丙酸钠无机盐培养基摇瓶培养，其中按照葡萄糖：丙酸钠为1:20-1:5的比例加入葡萄糖，每个丙酸钠浓度培养周期为1周，逐渐提高丙酸钠的浓度到5％，将最终获得的生长旺盛的菌株进行保种。
6.按照权利要求1所述一株瘤胃来源的耐受丙酸盐细菌驯化方法，其特征在于：所述前期丙酸钠浓度设定为0.2％、0.4％、0.6％、0.8％、1.0％，所述后期丙酸钠浓度设定为2％、3％、4％、5％，相对应葡萄糖的浓度为0.2％、0.3％、0.4％、0.5％；所述无机盐培养基各种盐浓度为：MnSO4 0.0399mg/L、ZnSO4·H2O0.0428mg/L、(NH4)2MoO4·4H2O 0.0347mg/L、FeCl30.25mg/L、CaCl2 36.4mg/L、MgSO4 67.5mg/L、K2HPO4·H20 108.75mg/L、Na2HPO4·12H2O167.4mg/L、KH2PO443.5mg/L、NH4Cl25.0mg/L。
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