[发明专利]减少小球藻贴壁的方法

说明书

本发明属于生物技术领域，公开了减少小球藻贴壁的方法，其包括如下步骤：将处于对数生长期的小球藻液，按照3‑10％的接种量接种到含有培养液的反应池中，然后添加50‑200mg/L的氨基酸，培养96‑120h，离心，收集藻细胞。本发明方法可以降低小球藻的贴壁现象，提高小球藻生物量。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及减少小球藻贴壁的方法。

背景技术

小球藻(Chlorella)为绿藻门小球藻属普生性单细胞绿藻，是一种球形单细胞藻类，直径3～8微米，是地球上最早的生命之一，出现在20多亿年前，是一种高效的光合植物，以光合自养生长繁殖，分布极广。小球藻借助阳光、水和二氧化碳，以每隔20小时分裂出4个细胞的旺盛繁殖能力，不停地将太阳能量转化生成蕴涵多种营养成分的藻体，并在增殖中释放出大量的氧气；而它的光合能力高于其他植物10倍以上。小球藻不仅可以作为水生经济动物的优秀天然饵料，同时还可以吸收水中的氮、磷等元素，降低水体的富营养化水平，净化水质。

小球藻中富含多糖类成分，生物活性研究实验表明其具有多种生物学活性及药用价值，如降血脂、抗血栓、降血糖抗炎、抗疲劳、增强免疫、抑制肿瘤生长等作用，现有的研究大多集中在如何提高藻细胞的多糖产量的研究中。对小球藻的前期生长状况研究较少，申请人在之前的研究成果“一种提高小球藻多糖产量的方法”等相关项目已经申报国家发明专利，其中，在前期的培养过程中通过添加萘乙酸钠和赤霉素，可以提高小球藻的分裂速率，通过在培养中后期阶段添加葡萄糖和花生四烯酸两种物质，相互协同，对胞内藻多糖的生成起到正向调节。

目前，小球藻最主要的方式是规模化人工培养。然而，在培养过程中，因重力、曝气不均和藻类的本身生理特性等，培养装置内壁或与藻液接触的物件上常常会出现贴壁现象。轻微的贴壁现象不会对藻细胞生长产生影响，但是一旦发生大规模贴壁现象，将产生恶性循环并形成不利影响，使藻细胞摄取营养困难、生存环境恶劣以及光照不足，如何在规模化培养小球藻中避免大规模贴壁现象的发生，是我们需要解决的技术问题。现有技术中对上述问题的研究相对较少，目前仅有为数不多的几篇报道，其中，“CN105754861A”公开了一种减少小球藻贴壁的方法，包括在培养液中添加乳化剂，能够减少小球藻的贴壁，提高小球藻的生物量；尽管该专利技术中认为添加乳化剂不会对小球藻的生长有不利影响，但是乳化剂必然会少量残留于藻类提取物中，为了提升藻类提取物的品质，我们要尽量避免乳化剂等化学物质的残留。

发明内容

针对现有技术存在的缺陷，本发明提供了减少小球藻贴壁的方法，该方法可以显著降低小球藻的贴壁现象，提高生物量。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

减少小球藻贴壁的方法，其包括如下步骤：

将处于对数生长期的小球藻液，按照3-10％的接种量接种到含有培养液的反应池中，然后添加50-200mg/L的氨基酸，培养96-120h，离心，收集藻细胞。

进一步地，所述培养的条件为：光照强度5000lux，22℃培养，光暗比为18:6，通气速率为0.2vvm。

进一步地，所述培养液的组分为：葡萄糖3g/L，硝酸钾 1.5g/L，氯化钠 1g/L，硼砂0.5g/L，磷酸二氢钾 0.5g/L，碳酸钙 0.1g/L，七水硫酸镁 50mg/L，柠檬酸铁铵20mg/L，萘乙酸钠10mg/L，赤霉素10mg/L。

进一步地，所述氨基酸的浓度为100g/L。

进一步地，所述氨基酸为组氨酸。

进一步地，所述组氨酸和精氨酸的混合物。

进一步地，所述组氨酸和精氨酸按照1:1的质量比进行混合。

进一步地，所述小球藻的接种密度为1-5×10⁶个/ml。