[发明专利]一种慢性创面修复基质的制备方法

说明书

本发明公开了一种慢性创面修复基质的制备方法，包括如下步骤：（1）取3~5月龄胎牛皮，剪碎，经冻融、超声波结合化学洗脱等处理，去除其中的细胞结构及其它免疫原物质；（2）采用静电纺丝技术，将去细胞胎牛皮细胞外基质和蒙脱石粉制成微球，低温干燥制成一种慢性创面修复基质。本发明制得的慢性创面修复基质能够有效吸收创面深处，保持创面清洁，同时，胎牛皮细胞外基质含有的活性生物因子有助于组织再生修复。

技术领域

本发明属于医用生物材料、组织工程修复领域，具体涉及一种慢性创面修复基质及其制备方法。

背景技术

伴随人口老龄化以及全球范围内糖尿病、肥胖的增加，慢性创面的发病率也日益增高，临床上常见的慢性创面有创伤感染、压疮、糖尿病溃疡、静脉性溃疡等等。慢性创面受组织缺氧、缺血、感染、局部生长因子数量减少、自身免疫力低下等的影响，愈合周期长，甚至常年不愈，给患者的生活带来了极大的影响。组织工程化基质的出现为慢性创面治疗提供了新的解决途径。

组织工程是以细胞生物学和材料科学为基础，多学科交叉的新型科学，其核心要素为细胞、支架和生长信息，其中一个好的支架可为细胞移植、损伤修复提供良好的载体。脱细胞真皮基质（ADM）是将真皮组织通过一系列物理化学及生物学方法去除表皮及皮内具有免疫原性的细胞成分，保留胶原等细胞外基质成分与结构，得到的一种具有三维空间结构的胶原基质材料。大量研究已经证实，ADM具有可诱导组织再生性，可为细胞提供生存及活动的微环境，促进细胞生长增殖，有助于促进新生血管和上皮形成，使组织完成愈合过程。

研究表明，胎牛皮（特指3~5月龄胎牛皮）结构与人皮相似，尤其在真皮胶原纤维束三维结构上存在较大相似性，与其它异种动物的真皮组织形态学相比较存在明显的优势。除此之外，胎牛皮的细胞外基质结构中含有大量促进组织细胞生长的蛋白，且其抗原性成分更易除去，基质成分更易被机体组织细胞作为营养物质吸收。因生物行业对胎牛血清的需求量大，导致大量胎牛皮副产物被废弃，然而胎牛皮经抗原去除处理后，却是一种优异的创面修复材料，尤其是对慢性难愈创面，更是具有特殊的应用价值。

天然蒙脱石是一种硅铝酸盐，具有层纹状结构和非均匀性电荷分布，对消化道内的病毒、病菌及其产生的毒素、气体等有极强的固定、抑制作用，使其失去致病作用；此外对消化道黏膜还具有很强的覆盖保护能力，修复、提高黏膜屏障对攻击因子的防御功能，具有平衡正常菌群和局部止痛作用。

通过组织工程技术去除组织中的抗原成分，并将蒙脱石结合在基质上制成慢性创面修复基质，最大程度地发挥胎牛皮细胞外基质的组织再生诱导功能，并利用蒙脱石的固定抑制毒素作用，为组织再生提供环境，从而辅助组织再生。

发明内容

本发明提供了一种难愈创面修复基质的制备方法，通过组织脱细胞技术将胎牛皮中的抗原成分去除，保留其组织中的活性基质成分，利用微球制备技术，将胎牛皮细胞外基质和蒙脱石有效结合在一起，形成微球颗粒，比表面积增大，能够吸收并固定不利于组织再生的液体渗出，固定毒素，招募细胞在微球上定植增生，引导组织再生，从而实现创面的修复，旨在改善慢性难愈创面患者的久治不愈的问题。

一种慢性创面修复基质的制备方法，包括以下步骤：

（1）取3~5月龄胎牛皮，剪切成不大于2mm的小块，纯化水洗涤3次，

（2）将步骤1中洗涤后的胎牛皮小块置于-196℃~-20℃环境中冷冻24h及以上。

（3）将步骤2中冷冻的胎牛皮进行恒温水浴解冻，恒温水浴解冻温度为25℃~37℃。

（4）将步骤3中解冻完成的胎牛皮水溶液沥干，纯化水洗涤3次，沥干，将胎牛皮转移至Triton X-100—PBS溶液中，浸泡1h，Triton X-100—PBS溶液的浓度为2%~4%。