[发明专利]基于银离子稳定的剪刀形三螺旋分子开关的荧光传感器及其应用

权利要求书

1.一种基于银离子稳定的剪刀形三螺旋分子开关的荧光传感器，其特征在于，包括：通过第一过渡辅助序列连接的双链臂和单链臂；

所述第一过渡辅助序列由若干T碱基组成；

所述双链臂包括通过第二过渡辅助序列连接的第一链和第二链；所述第一链包含转录因子识别序列I和三螺旋分子开关序列I；所述第二链包含转录因子识别序列II和三螺旋分子开关序列II；所述第二过渡辅助序列由若干T碱基组成，并标记有荧光基团；

所述单链臂包括第三过渡辅助序列和三螺旋分子开关序列III，所述第三过渡辅助序列由若干碱基组成，第三过渡辅助序列的末端标记有淬灭基团。

2.根据权利要求1所述的荧光传感器，其特征在于，所述荧光基团为FAM；所述淬灭基团为BHQ。

3.根据权利要求1所述的荧光传感器，其特征在于，所述转录因子识别序列I和转录因子识别序列II互补。

4.权利要求1-3任一项所述的荧光传感器在检测转录因子中的应用。

5.一种检测NF-κB p50的荧光传感器，其特征在于，包括：通过第一过渡辅助序列连接的双链臂和单链臂；

所述第一过渡辅助序列的碱基组成为TTT；

所述双链臂包括通过第二过渡辅助序列连接的第一链和第二链；所述第一链的碱基组成为GAGAGAGGGAAAGTCCC，所述第二链的碱基组成为GGGACTTTC C CT CT C TCTC，所述第二过渡辅助序列的碱基组成为TTT，第二过渡辅助序列上标记有荧光基团FAM；

所述单链臂包括第三过渡辅助序列和三螺旋分子开关序列，所述第三过渡辅助序列的碱基组成为TTTTT，第三过渡序列的末端标记有淬灭基团BHQ；所述三螺旋分子开关序列的碱基组成为CTCTCTCTCCCTTTC。

6.一种检测NF-κB p50的方法，其特征在于，所述方法不用于疾病的诊断，包括以下步骤：

将权利要求5所述的荧光传感器和AgNO₃在PBS缓冲溶液中混合均匀，孵育，然后加入不同浓度的NF-κB p50，二次孵育，进行荧光检测，构建荧光强度与NF-κB p50浓度之间的线性关系，利用构建的线性关系对NF-κB p50进行检测。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述PBS缓冲溶液的pH为7.4。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述AgNO₃的浓度为20μM。

9.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述孵育的条件为：37℃恒温箱中30min。

10.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述二次孵育的条件为：37℃恒温箱中10min。