[发明专利]一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒

说明书

本发明提出了一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒，该荧光探针为2‑[2‑4‑乙酰氧基‑苯基)‑乙烯基]‑3‑乙基‑1,1‑二甲基‑1H‑苯并[e]吲哚，本发明基于羧酸酯酶可与乙酰氧基发生水解反应，将乙酰氧基作为特异性响应基团，半花菁类染料作为荧光团，半花菁类染料荧光团自身具有良好的荧光性质，具有较长的发射波长，设计了一种半花菁类荧光探针，本设计的试剂盒与羧酸酯酶反应后溶液呈现粉红色并且发出强烈的荧光，灵敏度高，该显色反应仅在羧酸酯酶存在的条件下发生，其他常见的活性氧、氨基酸、酶类物种不产生干扰。

技术领域

本发明涉及化学分析、生物分析技术领域，特别是指一种用于检测羧酸酯 酶的荧光探针及其制备方法与专用检测试剂盒。

背景技术

羧酸酯酶(carboxylesterase,CaE)是α/β折叠水解酶家族中的一种酶，能够 催化氨基甲酰酯、硫酯、羧酸酯和酰胺等多种内源性和外源性化合物的水解。 CaE作为人体分布的一种重要的水解代谢酶，其在维持人体脂质代谢平衡、药 物及毒物的代谢清除中发挥不可忽视的作用。然而，CaE的异常变化又与多种 疾病的发生密切相关，例如，高血脂、脂肪肝、癌症等疾病。因此，建立一种 准确、快速、简便、特异性且能在活细胞和组织上实时原位检测的方法对相关 疾病的诊断和治疗具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针及其制备方法与 专用检测试剂盒。

本发明的技术方案是这样实现的：一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针，该 荧光探针为2-[2-4-乙酰氧基-苯基)-乙烯基]-3-乙基-1,1-二甲基-1H-苯并[e]吲哚， 其结构式如式Ⅰ所示：

本发明提出一种用于检测羧酸酯酶的荧光探针的制备方法，包括以下步骤：

步骤一：在70℃～90℃条件下，将式Ⅲ所示1,1,2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚与 碘乙烷混匀进行取代反应，反应6～20小时，得到式Ⅱ所示化合物，

步骤二：在催化剂存在的条件下，于40℃～70℃，将式Ⅱ所述的3-乙基-1,1,2- 三甲基-1H-苯并[e]吲哚与4-乙酰氧基苯甲醛混匀进行缩合反应，反应4～10小 时，得到式Ⅰ所示化合物，

优选的，所述催化剂为有机碱和无机碱中的至少一种；所述有机碱为三乙 胺和吡啶中的至少一种；所述无机碱为碳酸钾、醋酸钠、碳酸钠和碳酸氢钠中 的至少一种。

优选的，式Ⅱ所述的3-乙基-1,1,2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚、4-乙酰氧基苯甲 醛和催化剂的投料摩尔比为1：0.5～4：0.5～4。

优选的，式Ⅱ所述的3-乙基-1,1,2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚、4-乙酰氧基苯甲 醛和催化剂的投料摩尔比为1:1-4:1-4。

进一步优选，式Ⅱ所述的3-乙基-1,1,2-三甲基-1H-苯并[e]吲哚、4-乙酰氧基 苯甲醛和催化剂的投料摩尔比为1:1:1或1:4:4。

优选的，步骤一所述取代反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂为N,N-二 甲基甲酰胺、三乙胺、乙醇和乙腈中的至少一种。

步骤二所述缩合反应在有机溶剂中进行，所述有机溶剂为乙酸酐、乙醇和 乙腈中的至少一种。

本发明还提出一种专用检测试剂盒，包含式Ⅰ所示化合物和溶剂，

式Ⅰ所示化合物的浓度为1mM，

溶剂为乙醇或二甲基亚砜。

优选的，还包括缓冲液，