[发明专利]白芍的指纹图谱检测方法

权利要求书

1.一种白芍的指纹图谱检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)供试品溶液制备

精密称定白芍饮片粉末，置具塞锥形瓶中，加入体积浓度50～80％乙醇，提取30～60min，取出，取续滤液，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得白芍饮片供试品溶液；

(2)混合对照品溶液的制备

精密称取芍药苷、1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖、没食子甲酯、没食子酸、苯甲酰芍药苷、苯甲酸、氧化芍药苷和芍药内酯苷对照品，置于容量瓶中，加甲醇溶解并定容摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，得混合对照品溶液；

(3)高效液相色谱法测定白芍的指纹图谱

将按步骤(1)方法制备得到的10个批次的白芍饮片供试品溶液和混合对照品溶液分别注入高效液相色谱仪，测定指纹图谱；色谱条件为：

色谱柱为Merck C₁₈，规格为250mm×4.6mm，5μm，流动相：A相为乙腈，B相为含0.1％体积磷酸的水溶液；梯度洗脱；体积流量：1.0mL·min^-1，柱温：35℃，进样量10μL，检测波长：225nm；梯度洗脱程序为：0～5min，95％～95％A；5至23min，95-87％A；23～28min，87％～87％A；28～40min，87-80％A；40～45min，80％～80％A；45～70min，80-75％A；70～85min，75％～55％A；85至90min，55～0%A；90～100min，0％～95％A；

(4)将步骤3中获得的10批白芍供试品溶液的指纹图谱导出，并导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A；选择10批次白芍的色谱图中均存在的色谱峰作为共有峰；用平均值计算法生成白芍的对照指纹图谱，计算各共有峰的相对保留时间和相对峰面积；并根据混合对照品溶液色谱图的保留时间标注对照指纹图谱中峰的化学成分。

2.根据权利要求1所述的白芍的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(1)供试品溶液制备：精密称定白芍饮片粉末，置具塞锥形瓶中，加入60倍量体积浓度80％乙醇，超声提取30min，取出，取续滤液，用0.22μm微孔滤膜滤过，即得白芍饮片供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的白芍的指纹图谱检测方法，其特征在于，步骤(2)混合对照品溶液的制备：精密称取芍药苷对照品5.25mg，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖对照品5.25mg，没食子甲酯对照品5.03mg，没食子酸对照品5.27mg，苯甲酰芍药苷对照品5.14mg，苯甲酸对照品5.25mg，氧化芍药苷对照品5.22mg和芍药内酯苷对照品5.27mg置于10mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容摇匀，用0.22μm微孔滤膜滤过，得到浓度分别为0.525mg/mL、0.525mg/mL、0.503mg/mL、0.527mg/mL、0.514mg/mL、0.525mg/mL、0.522mg/mL和0.527mg/mL的芍药苷、1，2，3，4，6-五没食子酰葡萄糖、没食子甲酯、没食子酸、苯甲酰芍药苷、苯甲酸、氧化芍药苷和芍药内酯苷的混合对照品溶液。

4.根据权利要求1所述的白芍的指纹图谱检测方法，其特征在于，对照指纹图谱中有22个共有指纹峰。

5.根据权利要求4所述的白芍的指纹图谱检测方法，其特征在于，没食子酸为1号峰，保留时间为8.345min，没食子甲酯为2号峰，保留时间为24.372min，氧化芍药苷为3号峰，保留时间为26.227min，芍药内酯苷为4号峰，保留时间为36.302min，芍药苷为5号峰，保留时间为39.303min，苯甲酸为6号峰，保留时间为47.571min，1,2,3,4,6-五没食子酰葡萄糖为7号峰，保留时间为50.214min，苯甲酰芍药苷为8号峰，保留时间为82.281min。

6.根据权利要求1所述的白芍的指纹图谱检测方法，其特征在于，依据相似度数值，应用于白芍的质量控制，以指纹图谱相似度应大于0.90为检验质控标准。