[发明专利]生物纳米硒产生菌及利用该菌株制备生物纳米硒的方法

权利要求书

1.一株生物纳米硒产生菌，其特征在于：所述生物纳米硒产生菌的名称为芽孢杆菌Se8(Bacillus.sp)，其保藏编号为CCTCC M 2018422，保藏日期为2018年7月2日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为湖北省武汉市武昌区八一路珞珈山。

2.利用权利要求1所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)菌株芽孢杆菌Se8的培养：挑取芽孢杆菌Se8单菌落至YEP培养基中进行恒温振荡培养；

(2)诱导剂的添加：向步骤(1)的培养产物中，加入诱导剂，使诱导剂终浓度为1-3mg/L，继续恒温振荡培养；所述诱导剂为谷胱甘肽、生物素或曲拉通-100；

(3)亚硒酸钠的添加：向步骤(2)的培养产物中，添加浓度为5mol/L的Na₂SeO₃溶液，调节Na₂SeO₃终浓度为0.2-0.4mol/L，继续恒温振荡培养；

(4)生物纳米硒的分离提取：取步骤(3)中的培养液离心，弃去上清液，收集菌体沉淀，沉淀重悬于TE缓冲液中，加入溶菌酶至终浓度为5-10mg/mL，37℃水浴20-30min，水浴完成后，利用超声波破碎仪破碎残留菌体，离心收集上清液，随后高速离心，收集沉淀，重溶于TE缓冲液中，即为生物纳米硒初提物。

3.根据权利要求2所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：所述步骤(1)中挑取芽孢杆菌Se8单菌落至含有100mLYEP培养基的锥形瓶中，培养条件为28℃恒温振荡培养1-2d，150-200r/min，培养至菌群数量达到10⁷-10⁸CFU/mL。

4.根据权利要求2所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：所述步骤(2)中的培养条件为28℃恒温振荡培养6-12h，150-200r/min，至菌群数量达到10⁸-10⁹CFU/mL。

5.根据权利要求2所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：所述步骤(3)中的培养条件为28℃恒温振荡培养，150-200r/min，培养2-4d，至培养基颜色由无色变为红色，视为培养完成。

6.根据权利要求2所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：所述步骤(4)中培养液离心的转速为8000-10000r/min，离心时间为5min。

7.根据权利要求2所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：所述步骤(4)离心收集上清液时的转速为3000-5000r/min，离心时间为5-10min。

8.根据权利要求2所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：高速离心的转速为20000-30000r/min，离心时间为10-20min。

9.根据权利要求2所述的生物纳米硒产生菌制备生物纳米硒的方法，其特征在于：所述TE缓冲液的pH值为8，所述超声波破碎仪的破碎功率为80-100w，超声5s停10s，超声时间为20-30min。