[发明专利]一种表面附有半透保护膜的酶-磷脂微囊的制备方法

说明书

本发明公开了一种表面附有半透保护膜的酶‑磷脂微囊的制备方法，包括以下步骤：步骤一：取溶血磷脂和喜树碱至容器中混合，加入乙醇‑氯仿混合溶液加热至40℃，混合均匀后静置反应10min，将容器中抽真空通入电流，得到微胶囊球水凝胶；步骤二：取酶液和Tris‑HCl缓冲液，搅拌均匀后分别加入海藻酸钠和氯化钙溶液，恒温振荡后加入微胶囊球水凝胶，分散得到酶‑磷脂微囊；步骤三：取壳聚糖颗粒溶解后加入氯仿溶液，将氯仿吹干，加入戊二醛溶液反应，水洗至无戊二醛残留，喷雾干燥得到改性壳聚糖；步骤四：取改性壳聚糖乙醇溶胀，加入酶‑磷脂微囊，真空干燥。

技术领域

本发明属于酶固定技术领域，具体是涉及一种表面附有半透保护膜的酶-磷脂微囊的制备方法。

背景技术

微型胶囊，或微囊(Microcapsules)，系指固态或液态药物被囊材包裹而成的药库型微型胶囊。微囊中包载的药物可在特定的部位和介质中释放，具有缓释、控释或靶向释放等不同的释药特征。药物制成微囊(或微球)，可以实现以下作用：掩盖药物的不良气味及口味；提高药物的稳定性；降低药物对消化道的刺激；液体药物固体化，方便其使用；避免复方制剂中药物的配伍变化；制成缓控释制剂和靶向制剂；包裹活细胞或者生物活性物质。药物微囊是一种制剂中间体，可进一步将其加工成片剂、胶囊剂、注射剂、眼用制剂、贴剂、气雾剂和混悬剂等，应用于临床。

微囊技术是运用一定的方法和仪器，使用天然的或合成的高分子材料将固体，液体甚至是气体的微小颗粒包裹在直径为1～500μm的半透性或密封囊膜的微型胶囊内的技术。微胶囊内的物质由于与外界环境相隔离可以免受环境的影响，从而保持稳定。在适当条件下，被包封物质又可以释放出来。通过适当手段，可以达到控释效果，微囊技术在生物、医药、农业等等多方面都有广泛应用前景。

目前，将酶固定于磷脂微囊的方法还不够完善，制得的酶-磷脂微囊具有内表面积小、微囊强度低、酶活性损失大且制备过程繁琐，所以，目前需要一种表面附有半透保护膜的酶-磷脂微囊的制备方法。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明提供了一种表面附有半透保护膜的酶-磷脂微囊的制备方法。

本发明的技术方案是：一种表面附有半透保护膜的酶-磷脂微囊的制备方法，主要包括以下步骤：

步骤一：按照质量比2:1的比例取溶血磷脂和喜树碱至容器中混合，将摩尔比为5:1的乙醇-氯仿混合溶液加热至40℃倒入容器中，倒入过程中持续搅拌，混合均匀后静置反应10min，然后将容器中抽真空，通入电流，通过正负电荷的吸引发生瞬时凝胶化，得到微胶囊球水凝胶；

步骤二：取10mL浓度为0.8g/ml酶液，加入10ml 0.05mol/L的Tris-HCl缓冲液，搅拌均匀后在室温下静置3h，然后分别加入3mL 20mol/L的海藻酸钠和5mL 25mol/L的氯化钙溶液，恒温振荡15min，待冷却至室温后加入步骤一得到的微胶囊球水凝胶150g，用搅拌仪以300r/min的转速持续搅拌10h，分散得到酶-磷脂微囊；

步骤三：取粒径为0.3mm的壳聚糖颗粒充分溶解于2mol/L的盐酸溶液中，中和至中性后喷雾干燥，向干燥后的壳聚糖中加入氯仿溶液至浓度为5％，通入氮气将氯仿吹干，加入10mL 0.03mol/L的戊二醛溶液在35℃的温度下反应12h，然后水洗至溶液中无戊二醛残留，喷雾干燥得到改性壳聚糖；

步骤四：取步骤三中得到的改性壳聚糖用95％浓度的乙醇溶液溶胀，加入步骤二中得到的酶-磷脂微囊，在14-16℃下振荡30min，真空干燥，得到表面附有保护膜的酶-磷脂微囊。

进一步地，所述喜树碱为10-羟基喜树碱，在实验中发现，10-羟基喜树碱毒性较低，且可以增加磷脂微囊内表面积，便于固定酶，相较于喜树碱更为适用于本制备方法。

进一步地，所述步骤二中恒温振荡是以45-50℃的温度，振荡频率为2kHz进行恒温振荡处理，可以形成较为均匀的酶-磷脂微囊。