[发明专利]转基因抗虫耐除草剂玉米CM8101外源插入片段旁侧序列及其应用

说明书

本发明属于植物生物技术领域，具体涉及一种转基因抗虫耐除草剂玉米CM8101外源插入片段旁侧序列及其应用。本发明提供的转基因玉米CM8101经Southern blot鉴定有一个插入位点，这个插入位点的外源插入片段的5’端和3’端旁侧序列如SEQ ID No.1、2所示。本发明提供了用于检测该旁侧序列的引物对，分别如SEQ ID No.3‑4和SEQ ID No.5‑6所示的核苷酸序列。本发明的转基因抗虫耐除草剂玉米CM8101外源插入片段旁侧序列的鉴定适用于对转基因玉米CM8101包括亲本、杂种F1和后代，及其植株、组织、种子及其制品的检测。

技术领域

本发明涉及植物生物技术领域，具体地，涉及一种转基因抗虫耐除草剂玉米CM8101外源插入片段旁侧序列以及用于检测该转基因玉米的特异性引物对，本发明还涉及利用该引物对进行转基因玉米CM8101亲本或杂交后代及其制品检测的方法和试剂盒。

背景技术

玉米是重要的粮食、饲料及工业原料作物，在国家粮食安全和国民经济发展中占有重要地位。近年来，我国玉米种植面积保持在5亿多亩，主要分布于全国20多个省、市、自治区。由于耕作制度、自然气候等变化，亚洲玉米螟已经严重影响到玉米的单产、总产和品质，成为我国玉米生产的重要害虫。田间杂草与作物竞争水、肥、光能及生长空间，直接影响农作物产量与质量。另外，随着农村劳动力往城市迁移速度的加快，玉米种植的规模化和机械化成为趋势，这使得传统的人工除草方式变得不现实。虫害与草害是影响玉米生产的重要因素，培育抗虫耐除草剂玉米是解决该难题的关键技术途径，能够有效地防治玉米螟等鳞翅目害虫及杂草的危害，挽回产量损失，减少农药使用量，具有巨大的经济，环境和社会效益。

Bt基因Cry1Ab是目前应用较为广泛的针对鳞翅目害虫如玉米螟，棉铃虫的抗虫基因(http://cera-gmc.org/GMCropDatabase)。在转基因玉米方面，Cry1Ab基因的商业化应用最为广泛。孟山都公司MON80100、MON802、MON810；先正达公司的BT11、BT176以及杜邦先锋公司MON809等转化体及其衍生品种均实现了商业化推广。转Cry1Ab玉米的商业化推广已近20年，其安全性已有定论，即通过安全评价、获得安全证书的转基因生物及其产品是安全的。

中国农业科学院作物科学研究所提出的人工改造合成的Bt抗虫基因Cry1Ab-Ma，已获得国家发明专利授权(ZL 201010574708.X)，bar基因是迄今为止应用较多的一个抗除草剂基因。采用35S组成型启动子融合小麦叶绿体A/B结合蛋白的非翻译前导链序列(L-Cab)和水稻actin1内含子启动经过密码子优化后Cry1Ab-Ma基因表达，由小麦HSP17蛋白的末端非翻译区作为终止子；采用2×P35S组成型启动子融合TEV增强子启动bar基因的表达，由大豆Tvsp作为终止子，构建包含bar基因的植物表达载体。利用农杆菌介导法转入到玉米基因组中，获得了一个抗虫耐除草剂的转基因玉米事件CM8101，在抗虫和耐除草剂方面具有良好的特性，今后有可能进入商业化种植。对转基因玉米CM8101进行转化事件特异性检测，能更好的对转基因玉米CM8101进行监督管理。而外源插入片段的旁侧序列和依据此旁侧序列建立的检测方法，是进行监督管理的一个重要指标。因此需要获得转基因玉米CM8101的旁侧序列，并建立鉴定体系以备对此事件的监督管理。

发明内容

本发明的目的在于提供一种转基因玉米CM8101外源插入片段旁侧序列及其应用。

本发明另一目的在于提供一种转基因玉米CM8101的PCR检测方法和试剂盒。

本发明的抗虫转基因玉米事件CM8101按如下方式获得：