[发明专利]一种基于人钙调蛋白磷酸酶B亚基的靶向肽、制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种新的靶向肽，该靶向肽是以CNB为基础的截短体。同时本发明公开了一种以Trun3作为靶向肽运输抗肿瘤药物的制备方法，用于介导抗肿瘤药物靶向到肿瘤部位的治疗方案。本发明的实验证明，Trun3融合蛋白能靶向到许多TLR4高表达的恶性肿瘤组织内，从而提高抗肿瘤药的药效，降低抗肿瘤药的副作用，起到靶向治疗的效果。Trun3是基于CNB的序列发明的，CNB是一个具有良好前景的抗肿瘤药物，因此该片段Trun3本身也具有一定的抗肿瘤效果，在抗肿瘤药物的治疗方面具有较好的应用前景。

技术领域

本发明属于生物医学领域，涉及一种基于人钙调蛋白磷酸酶B亚基的多肽序列及用此序列作为靶向肽进行肿瘤治疗的方法。

背景技术

钙调蛋白磷酸酶是目前已知的唯一一个活性受Ca+/钙调素(CaM)调节的丝(Ser)/苏氨酸(Thr)蛋白磷酸酶。钙调蛋白磷酸酶由A，B两个亚基按1：1的比例组成，CNA是催化亚基，CNB是调节亚基。CNB基本的功能是调节CNA的催化活性，但是越来越多的研究表明，CNB有独立于CN的生理作用，CNB的缺失会增加患鳞状细胞癌的风险。我们实验室的研究表明，重组钙调蛋白磷酸酶B亚基(rhCNB)具有良好的抗肿瘤效果，能显著抑制肉瘤，肝癌，胃癌，肺癌等多种荷瘤小鼠的生长。进一步的研究表明，rhCNB是一个免疫调节蛋白，主要调节了先天免疫细胞的活性，比如它能诱导DCs细胞的成熟，提高其抗原递呈能力，促进巨噬细胞和自然杀伤细胞(NK细胞)的杀伤活性，并诱导相关细胞因子的分泌和生产。

人的CNB由170个氨基酸组成，具有4个EF-hand结构，EF-hand的典型结构特征是螺旋-环-螺旋结构，每个EF-hand结构均可以结合一个钙离子，不同的EF-hand区域对钙离子的结合亲和力不同，甚至可以相差100万倍左右。此外，CNB还是高度疏水的分子，疏水性可能与CNB的抗肿瘤活性有关。

把抗肿瘤药物运输至肿瘤细胞是肿瘤靶向治疗的主要目的，可以大大减少药物的副作用，提高抗肿瘤药物的作用效果。基于肽的靶向运输系统是一个不错的选择，肽具有良好的生物降解性，生物相容性，低毒和易于合成的优点，此外，能进入细胞内部的药物运输系统具有更重要的价值，因此发展基于肽的靶向运输系统在抗肿瘤药物的开发中具有重要意义。

发明内容

本发明拟解决的关键问题是用CNB的截短体进行抗肿瘤治疗，克服CNB的耐药性，并将其作为靶向肽与其他抗肿瘤药物连接运输抗肿瘤药物至肿瘤部位，减少副作用，提高抗肿瘤治疗效果。

本发明采用了如下技术方案：

根据本发明的一个方面，本发明提供了一种靶向肽，所述靶向肽的氨基酸序列为：

(1)SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或者

(2)SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列，或者

(3)对(1)或(2)所述的氨基酸序列进行一个或几个氨基酸的缺失、添加和/或取代，但其靶向肽功能不变的氨基酸序列。

本领域人员公知，组成蛋白质的20种氨基酸残基，按照侧链极性可以分成四类：

(1)非极性的氨基酸：丙氨酸(Ala)、缬氨酸(Val)、亮氨酸(Leu)、异亮氨酸(Ile)、甲硫氨酸(Met)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)和脯氨酸(Pro)；

(2)极性不带电荷的氨基酸：甘氨酸(Gly)、丝氨酸(Ser)、苏氨酸(Thr)、半胱氨酸(Cys)、天冬酰胺(Asn)、谷氨酰胺(Gln)和酪氨酸(Tyr)；

(3)带正电荷的氨基酸：精氨酸(Arg)、赖氨酸(Lys)和组氨酸(His)；