[发明专利]一种抗体的纯化方法

说明书

本发明提供了一种抗体的纯化方法。一种抗体的纯化方法，包括蛋白A亲和层析步骤；所述蛋白A亲和层析的方法为：在上样之后和用洗脱液洗脱目标抗体之前，先用中间清洗缓冲液洗涤柱床；所述中间清洗缓冲液为：pH值为5‑6，电导率为20‑100mS/cm的缓冲液。本发明通过在蛋白A亲和层析过程中增加中间清洗的步骤提高了对HCP、DNA的去除能力，进而提高了阴离子交换层析去病毒的能力。

技术领域

本发明涉及抗体纯化领域，尤其是涉及一种抗体的纯化方法。

背景技术

在制药工业中，有许多来源于生物技术的药物，人们对生物制药的兴趣也越发浓厚。低毒副作用、高特异性疗效、较长的半衰期和平台化的生产工艺技术等特点，使单抗在治疗生物制品领域处于领先地位，是最成功的一类生物制品。迄今，大部分的单抗都是由哺乳动物细胞表达的，这是由于是哺乳动物细胞可以完成复杂的糖基化修饰，而糖基化修饰可以增加蛋白的稳定性及溶解度，以达到较长的半衰期；而目前最常用的单抗表达系统为CHO细胞系，其产生的单抗药物的糖基化水平最接近人的IgG糖基化修饰。当治疗用蛋白由动物细胞系表达时，需要考虑来自于细胞系和培养基的病毒污染风险。为了确保产品的安全性以及符合法规的要求，应设计多步纯化步骤，不仅为了去除产品/工艺相关杂质，也为了去除/灭活病毒。典型的单抗纯化步骤包括固液分离、蛋白A亲和层析捕获、低pH值孵育病毒灭活、两步层析精纯，纳滤去病毒和超滤等步骤。

阴离子交换层析(AEX)是一种在抗体纯化中去除病毒普遍使用的工艺，其主要采用流穿操作模式。AEX去除病毒的机理是静电作用，料液的电导率值、杂质含量(如HCP、DNA)对病毒去除能力影响较大。降低料液的杂质含量以及采用合适的电导率可以提升AEX病毒清除能力。

在单抗提纯工艺中，阴离子交换层析去除病毒的上游处理步骤通常是蛋白A亲和层析。蛋白A亲和层析是在单抗纯化应用最广泛的初纯步骤，可以从复杂的细胞培养液中特异性捕获单抗。蛋白A亲和层析具备一定的HCP、DNA去除能力，因此蛋白A亲和层析对HCP、DNA的去除效果成为阴离子交换层析去除病毒能力的关键因素之一，然而常规蛋白A亲和层析工艺的病毒去除能力十分稳健，工艺参数的变化对其病毒去除能力没有实质的影响。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗体的纯化方法，该方法通过在蛋白A亲和层析过程中增加中间清洗的步骤提高了对HCP、DNA的去除能力。

为了解决以上技术问题，本发明提供了以下技术方案：

一种抗体的纯化方法，包括蛋白A亲和层析步骤；

所述蛋白A亲和层析的方法为：在上样之后和用洗脱液洗脱目标抗体之前，先用中间清洗缓冲液洗涤柱床；

所述中间清洗缓冲液为：pH值为5-6，电导率为20-100mS/cm的缓冲液。

以上方法利用：pH值为5-6，电导率为20-100mS/cm的缓冲液清洗样品，去除其中的HCP、DNA。相比无中间清洗步骤的层析工艺，本发明对HCP、DNA的去除率有显著改进，所得洗脱液中HCP含量低于1000ppm，残留DNA的含量低于100pg/mg。

本发明中，中间清洗缓冲液的pH值和电导率使去除HCP、DNA的关键参数，pH可采用5-6范围内的任意值，例如5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0等，电导率可采用20-100mS/cm范围内的任意值，例如20mS/cm、25mS/cm、30mS/cm、35mS/cm、40mS/cm、45mS/cm、50mS/cm、55mS/cm、60mS/cm、65mS/cm、70mS/cm、75mS/cm、80mS/cm、85mS/cm、90mS/cm、95mS/cm、100mS/cm等。

本发明在以上增加中间清洗的基础上，还可以进行以下改进：