[发明专利]一种小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型的建立方法及应用

说明书

本发明公开了一种小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型的建立方法及应用。本发明利用角膜环钻和虹膜恢复器刮除圆圈内角膜上皮，建立单纯疱疹病毒HSV‑1经眼睛接种感染小鼠，建立小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型。本发明用环钻法制造的角膜缺损深度、面积固定，建立的模型更加稳定统一，可避免模型带来的较大差异；操作精确，可避免人为操作差异带来的影响，易于重复；适用于多种研究方向，多种模型动物，易于推广；单眼接种病毒，与临床连接更紧密；大角膜缺损，低病毒量，死亡率易于控制在合适范围。该动物模型重复性、稳定性好；该构建和评估方法操作简单，技术、设备要求低，成功率高。

技术领域

本发明涉及一种小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型的构建方法及其应用，属于人类疾病动物模型技术领域。

背景技术

HSV-1是流行率较高的病毒，拥有全球50％-90％的血清流行率，并且还有逐年增长的趋势。每年约有3000-5000例因HSK反复发作导致角膜盲，严重的影响着患者的生活质量；约有750-1000例新生儿感染HSV-1导致疱疹病毒性脑炎，影响神经系统的功能，造成新生儿智力障碍。HSV-1感染发病机制的研究对于疾病的预防治疗都是极其重要的，而一组稳定统一有效的动物模型，对于后续的其发病机制的研究研究又是至关重要的。

近年来针对各种角膜疾病发病机制以及治疗的研究快速发展，但对物模型建立与鉴定方法的研究却相对滞后。角膜疾病危害患者的身心健康，动物角膜较小，操作相对精细，一组有效的动物模型建立，对于角膜疾病研究是至关重要的。传统划痕法，使用“刀片、缝针、注射针头”等锐器，操作较粗糙，故也比较简单易行，但是操作上，容易造成角膜损伤面积，深度不一致，影响模型的一致性，对模型的后续应用带来影响。

发明内容

针对以上技术问题，本发明的目的在于提供一种小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型的构建方法。所述的方法包括以下步骤：

1.一种小鼠单纯疱疹病毒型角膜炎模型的建立方法，包括以下步骤：

1)实验动物的准备：6-8周龄雌性Balb/c小鼠，并进行术前检查其双眼，确保无角膜疾患；

2)动物的麻醉：使用氯胺酮后腿肌肉注射，3-5分钟后小鼠全身麻醉，再用盐酸奥布卡因滴眼进行眼表麻醉；

3)用角膜环钻在小鼠角膜中央印一个圆圈，用虹膜恢复器刮除圆圈内角膜上皮，在小鼠右眼接种5*10³-1*10⁴PFU HSV-1 17+病毒，左眼接种等体积DMEM培养液，建立了小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型。

进一步地，所述的小鼠，也可替代为树鼩、兔子其它实验动物。

进一步地，步骤3)中所述的HSV-1 17+病毒的最佳剂量为7*10³PFU。

进一步地，步骤2)中所述的氯胺酮的用量为50mg/kg～100mg/kg。

进一步地，步骤2)中角膜环钻可根据动物角膜大小更换为直径1-2mm。

本发明还提供利用上述方法建立的小鼠单纯疱疹病毒性角膜炎模型在相关疾病研究、临床、疾病药物筛选方面的应用。

本发明创新点：

①本发明使用角膜环钻和虹膜恢复器制造角膜缺损从而建立单纯疱疹病毒性角膜炎模型，与传统的造模方法相比，传统方法使用刀片、缝针等锐器在角膜上皮进行网格状或者井字形划痕制造角膜缺损再接种病毒造模；使用本发明的方法制造的角膜缺损面积深度、统一建立的动物模型更加稳定统一，划痕造模法无法达到深度，面积统一，将对后续实验有一定的影响。

②本发明双眼制造角膜缺损后，右眼接种病毒，左眼接种等体积DMEM，单眼感染，与临床单眼发病相贴合，单眼接种病毒是因为此病临床上几乎都为单眼发作，且单眼接种可保存小鼠生存所用的视力，且保存了小鼠生存视力。