[发明专利]一种用革兰氏阴性细菌感染快速检测脓毒病的新方法

说明书

脓毒病是一种危害生命的全身性感染，需要在快速测定病原体的基础上进行适当和快速的治疗。革兰氏阴性菌(GNB)是内毒素(LPS)作为其特征性替代生物标志物的主要致病病原体。在这项研究中，首先探索了一种新的方法，首先通过GNB培养增加LPS，然后通过动态浊度测定法(KT‑TALA)检测鲎变形细胞溶解物(TAL)的LPS。优化了样品制备程序。结果表明，在高GNB浓度下，LPS可在培养后3小时检测到，提前6.5‑7.5小时，而BD BACTEC阳性报告在9.5‑10.5小时；在低GNB负载下，BD BACTEC系统检测GNB需要22‑26小时，但KT‑TALA系统仅需9小时来检测GNB的LPS，提前13‑17小时。本发明的检测GNB感染LPS的新方法比传统的BD BACTEC系统快得多，特别是在细菌负荷较低的脓毒病的早期阶段，这将有助于在更早的时间内做出适当的治疗决策。

技术领域

本发明一般涉及培养疑似脓毒病的血液，并使用动态浊度TAL测定(KT-TALA)系统动态取样由革兰氏阴性细菌(GNB)在血液中产生的内毒素脂多糖(LPS)，用于快速检测LPS。

背景技术

脓毒病是最危险的情况，需要立即进行专用治疗，因为每小时延迟会使死亡率增加5-10％，导致高达～30％的死亡。脓毒病的高发病率主要与创伤、感染、主要器官功能障碍和许多疾病，如癌症、衰老等的末期有关。快速检测系统侵入的病原体对于挽救生命至关重要。

目前，血培养仍是脓毒病诊断的金标准，其利用累积到一定水平的代谢产物，用BDBACTEC系统触发阳性报告基因(http：//www.bd.com/en-us/offerings/capabilities/microbiology-solutions/blood-culture/bd-bactec-fx-blood-culture-system)。对于～50％的脓毒病患者，这需要大约16-24小时，对于其余的患者，大约需要＞24小时，这对于快速制定治疗决策来说所需的时间太长了。此外，并非BD BACTEC系统都能检测到血液中的所有GNB。Thomas等人报道，在培养物中发现12个样品是内毒素阳性而没有相应的GNB。在这12种阳性内毒素检测中的7种中，可以提供这些阳性检测的实验室或临床解释。这组数据表明，非常需要一种新的测定来补偿GNB感染中BD BACTEC系统的“盲点”。

众所周知，由鲎(Limulus polyphemus)的阿米巴样细胞制备的TAL是检测GNB的LPS的最敏感的试剂。动态浊度TAL测定(KT-TALA)的作用机制是内毒素激活酶化合物C，然后激活TAL的化合物B，并触发凝结酶的级联并形成凝胶，其可以用比浊读数器进行动力学记录。这种灵敏的检测方法已广泛用于检测不同生物样本中的内毒素，如血液，尿液，腹水，胸腔积液，脑脊液，支气管肺泡灌洗液，空气和水。与传统的GNB培养试验相比，LPS-TAL试验更灵敏，更可靠。

然而，在许多脓毒病病例中，特别是在脓毒病发作期间，即使使用最灵敏的KT-TALA方法，血液内毒素的水平也是不可检测的。有人提出，只有当血浆LPS＞0.5EU/ml时，才能确定GNB引起的内毒素仅发生在患有感染性休克或严重脓毒病的患者中，这对于有效治疗来说为时已晚。迫切需要开发更灵敏的用于检测LPS的基于TAL的方法。

来自GNB脓毒病的血液样本在37℃富含营养物中进行短时间(几小时)的培养，每20分钟GNB快速加倍，大量产生/释放LPS，其可通过KT-TALA方法容易地检测到并且比BDBACTEC系统血培养报告为LPS+GNB+脓毒病早得多。

开发灵敏LPS检测的新方法不仅有助于早期诊断GNB脓毒症，还有助于监测治疗效果，这可能是临床医生和研究人员所欢迎的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种不仅有助于早期诊断GNB脓毒症，还有助于监测治疗效果的开发灵敏LPS检测的新方法。