[发明专利]ECM1基因敲除小鼠在抗肝纤维化药物筛选中的应用

说明书

本发明提供了一种ECM1基因敲除小鼠在抗肝纤维化药物筛选中的应用，具体地，本发明提供了一种非人哺乳动物的肝纤维化或其相关疾病动物模型的制备方法，包括以下步骤：(a)提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的ECM1基因失活，得到ECM1基因失活的非人哺乳动物细胞；和(b)利用步骤(a)中得到的ECM1基因失活的细胞，制备得到ECM1基因失活的肝纤维化或其相关疾病动物模型。本发明的动物模型是一种有效的肝纤维化或其相关疾病的动物模型，可用于研究肝纤维化或其相关疾病，并可以用于特定药物的筛选和测试试验。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体地，本发明涉及ECM1基因敲除小鼠在抗肝纤维化药物筛选中的应用。

背景技术

肝纤维化是一个动态的肝脏受损修复过程，类似于伤口修复反应，其特征是细胞外基质在肝脏内的非正常聚集。任何一种导致肝脏长期慢性损伤的因素都会诱导出这种修复反应。在中国，最常见的的肝脏损伤因素就是HBV和HCV慢性感染导致的肝损伤。而在发达国家非酒精性脂肪性肝(NAFLD)则是最常见的发病因素。随着经济水平的发展和优秀的抗病毒药物和疫苗的出现，HBV和HCV的发病率在逐渐下降，非酒精性脂肪性肝的发病率和流行率都在上升。NAFLD现在被公认为是美国慢性肝病的最常见原因，相信随着中国经济的不断发展，非酒精性脂肪性肝也会成为中国的头号肝病。其他肝纤维化病因也包括酒精性肝病，药物引起的肝脏疾病，和自身免疫，代谢和胆道疾病引起的肝脏疾病。

肝纤维化的过程是肝脏内胶原纤维生成的速度大于降解的速度。尽管肝纤维化可以在消除损伤后发生逆转，但慢性持续损伤可导致细胞外基质蛋白高度交联并丧失潜在的可逆性。肝硬化则是纤维化的最终阶段，肝实质大量缺失和血管结构发生严重扭曲。肝硬化可导致肝功能失调性疾病，这是一个重要的致死性疾病之一。失代偿性肝硬化的表现包括可以导致腹水的门静脉高压，静脉曲张出血和肝性脑病。此外，肝硬化是一种“癌前状态”，伴随着时间的推移，肝细胞癌(HCC)的风险增加，即使是尚未出现肝硬化的进展性纤维化患者，其HCC的风险也会增加。

目前肝纤维化或其相关疾病动物模型多为诱导型动物模型，有很多缺点，比如造模时间过长，无肝硬化症状如腹水或死亡等。

因此本领域迫切需要开发一种可以作为研究肝纤维化的发生机理以及新药筛选的有力工具的动物模型。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可以作为研究肝纤维化的发生机理以及新药筛选的有力工具的动物模型。

本发明第一方面提供了一种非人哺乳动物的肝纤维化或其相关疾病动物模型的制备方法，包括以下步骤：

(a) 提供非人哺乳动物的细胞，将所述细胞中的 ECM1基因失活，得到 ECM1基因失活的非人哺乳动物细胞；和

(b) 利用步骤(a)中得到的 ECM1基因失活的细胞，制备得到 ECM1基因失活的肝纤维化或其相关疾病动物模型。

在另一优选例中，所述肝纤维化或其相关疾病动物模型为非诱导型自发肝纤维化或其相关疾病的动物模型。

在另一优选例中，在步骤(a)中，包括如下步骤：

(a1)利用DNA同源重组技术，将所述 ECM1基因中的编码区(如外显子1至外显子10)或非编码区(如5’UTR或3’UTR)或3’编码区或内含子区进行剔除或基因编辑，并用筛选标记替换，得到 ECM1基因失活的非人哺乳动物细胞。

在另一优选例中，在步骤(b)中，还包括如下步骤：