[发明专利]一种香豆素衍生物及其合成方法和在检测硫化氢中的应用

说明书

本发明提供了一种香豆素衍生物及其合成方法和在检测硫化氢中的应用，所述衍生物的中文名称为2‑氧代‑2H‑色烯‑7‑基2‑((2,4‑二硝基苯基)硫代)苯甲酸酯，英文名称为2‑oxo‑2H‑chromen‑7‑yl 2‑((2,4‑dinitrophenyl)thio)benzoate，命名为CDP。本发明提供了一种香豆素衍生物CDP对硫化氢特异性检测的方法，在DMSO:PBS(7:3,v/v,PBS buffer,pH 7.4)的溶液中，通过荧光分光光度计定量检测硫化氢的含量。该检测过程简便、灵敏、快速，检测结果准确。

技术领域

本发明涉及香豆素衍生物和硫化氢检测，具体属于一种香豆素衍生物及其合成方法和在检测硫化氢中的应用。

背景技术

研究表明，内源性的硫化氢主要来自于L-硫化氢的酶解作用，其生成机制至少与4种不同的酶有关:胱硫醚-β-合成酶(CBS)、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)、3-巯基丙酮酸硫转移酶(3-MST)和硫化氢酶(CL)。这些酶广泛的存在于人体各种组织和器官中。在生理浓度水平下，硫化氢参与一系列的生理调控过程，例如调节血管张力、心肌收缩、神经传导和胰岛素分泌等。细胞一旦不能维持其正常的硫化氢浓度，便会引起动脉和肺动脉高压、阿尔茨海默氏症、胃粘膜损伤和肝硬化等疾病。此外，硫化氢也可清除活性氧和活性氮物种。许多研究还表明三个气体递质硫化氢、一氧化氮和一氧化碳之间还通过各种交互作用调控人体的健康与疾病。

应生物体系中硫化氢浓度水平检测的要求，设计选择性好、灵敏度高、具有低细胞毒性的用于检测活细胞和组织内硫化氢水平变化的荧光探针，已成为生物医学发展中具有挑战性的前沿课题之一。

在本发明中，合成了一种基于香豆素的化合物，通过硫化氢和化合物在反应前后荧光变化，实现硫化氢的特异性检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种香豆素衍生物及其制备方法，所述香豆素衍生物可用于硫化氢检测，且检测方法简单，操作方便，选择性好，灵敏度高。

本发明提供的一种香豆素衍生物，中文名称为2-氧代-2H-色烯-7-基2-((2,4-二硝基苯基)硫代)苯甲酸酯，英文名称为2-oxo-2H-chromen-7-yl 2-((2,4-dinitrophenyl)thio)benzoate，命名为CDP结构式为：

本发明提供的一种香豆素衍生物CDP的合成方法，步骤为：

将2-[(2,4-二硝基苯基)硫代]苯甲酸，4-二甲基氨基吡啶，1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和7-羟基香豆素在无水二氯甲烷中混合，将混合物在室温下搅拌过夜；减压除去溶剂，所得残余物通过硅胶柱色谱进一步纯化，得到浅黄色粉末状目标物CDP；其中2-[(2,4-二硝基苯基)硫代]苯甲酸和7-羟基香豆素的摩尔比为1：1。

所述柱色谱的洗脱剂为体积比20：1的二氯甲烷和甲醇的混合物。

所述香豆素衍生物CDP可用于硫化氢检测。

本发明提供的一种检测硫化氢的方法，步骤为：

(1)、配制pH＝7.4、浓度为10mM的PBS缓冲溶液，配制20mM的硫化氢水溶液；

(2)、取2mL的DMSO/PBS(7:3v/v,pH 7.4)溶液、2μL CDP的DMSO溶液加到一个荧光比色皿中，在荧光分光光度仪上检测，随着待测样硫化氢的加入,465nm处的荧光强度的逐渐增强；