[发明专利]一种高效液相色谱检测橙皮苷的方法

说明书

本发明公开了一种高效液相色谱检测橙皮苷的方法。该方法包括：1)橙皮苷前处理；2)高效液相色谱检测。本发明通过选择纯甲醇溶液，实现了橙皮苷的有效溶解；选择超声处理，实现了橙皮苷溶解液的澄清稳定；选择超纯水定容，消除了橙皮苷测试过程中前沿峰，实现了标准曲线的准确绘制。对于橙皮苷的定量测定不准确，本发明确定了橙皮苷简单快速易溶解前处理方法和获得了良好的定容溶剂，从而实现橙皮苷的标准曲线的准确绘制，为橙皮苷样品的定量检测提供了基础。

技术领域

本发明属于分析化学领域，更具体地，涉及一种高效液相色谱检测橙皮苷的方法。

背景技术

橙皮苷是一种广泛存在于柑橘类水果中的类黄酮物质，其化学结构为具有双氢黄酮氧苷结构，呈弱酸性，提取得到的粗产物为淡黄色粉末。纯品为白色针状晶体，略带苦味，难溶于水，几乎不溶于丙酮、苯、氯仿，微溶于甲醇、热冰醋酸，可溶于甲酰胺、二甲酰胺，易溶于稀碱溶液，纯度为97％的橙皮苷熔点范围为257-260℃，分子量为610.6。橙皮苷具有维持渗透压，增强毛细血管韧性，缩短出血时间，降低胆固醇等作用，在临床上用于心血管系统疾病的辅助治疗，可培植多种防止动脉硬化和心肌梗塞的药物，是成药“脉通”的主要原料之一。在食品工业中可用作天然抗氧化剂。也可用于化妆品行业。

目前关于橙皮苷定量测定方法较多，橙皮苷的定量分析有库仑滴定法、紫外分光光度法、薄层扫描法和高效液相色谱法。库仑滴定法、紫外分光光度法、薄层扫描法测定误差较大，微量难以准确测定。高效液相方法重现性好，检出限低，简单易操作，但存在橙皮苷标品溶解溶剂难选择，前处理繁琐，标准曲线难以成比例等问题。

2005版《中国药典》，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(40：60)为流动相；检测波长为284nm。供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约0.2g，精密称定，加甲醇20mL，加热回流1小时，冷却至室温，转移至50mL量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器和残渣，洗液并入同一量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，过滤，取滤液，即得。

谭生建精密称取黄芩苷对照品12.00mg，置100mL量瓶中，加70％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品储备溶液(每1mL含黄芩苷120.0μg)。重复实验发现标品放置15min出现混浊现象，标准曲线不成比例，难以进行定量分析。

赵磊精密称取橙皮苷对照品5.95mg，置于50mL容量瓶中，用甲醇稀释至标线，混匀；以甲醇为流动相A，以冰乙酸－水(1∶300)为流动相B，进行梯度洗脱，检测波长为284nm，流量为1.0mL/min，柱温为30℃。重复实验发现标品难以全部溶解且出现前沿峰。前沿峰即色谱峰形前沿，属于色谱峰形异变的一种，前沿峰的出现严重影响定量的精确度甚至导致分析工作无法进行。

发明人重复上述文献的方法，发现上述方法均存在橙皮苷标品前处理繁琐，回收率不高，且橙皮苷标准样品难溶解，标准曲线不成比例，容易出现前沿峰等问题。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中橙皮苷标品测定前处理难溶解和标准曲线难以成比例的问题，提出一种能够有效构建标准曲线定量检测橙皮苷的方法。

为了实现上述目的，本发明提供一种高效液相色谱检测橙皮苷的方法，该方法包括：

1)橙皮苷前处理

在超声条件下，将橙皮苷以纯甲醇溶解，然后添加超纯水，并以纯甲醇定容至指定体积，其中，超纯水的添加量为定容后的指定体积的0.12～0.20vt％；

2)高效液相色谱检测

将步骤1)定容后的样品进行液相色谱检测，液相色谱检测条件包括：采用A和B双泵系统，流速为0.5～1.5mL/min，流动相A为乙腈，流动相B为浓度0.1％的磷酸水溶液；检测波长为283nm，柱温为30～60℃。

根据本发明，超声的目的是在于使溶解的效率更高。