[发明专利]一种荧光素衍生物DCCT及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种荧光素衍生物DCCT及其制备方法和应用，所述荧光素衍生物，中文名称为O，O'‑(2'，7'‑二氯荧光素‑3'，6'‑二基)S，S'‑二‑对‑甲苯基双(碳酸酯)，英文名称为O,O'‑(2',7'‑dichlorofluorescein‑3',6'‑diyl)S,S'‑di‑p‑tolyl bis(carbonothioate)，缩写为DCCT。本发明提供了一种对去甲肾上腺素特异性检测的方法，是基于荧光素衍生物DCCT，在PB/DMSO(v/v，1:1，pH5.0)溶液中检测去甲肾上腺素。本发明DCCT可通过荧光成像技术检测脑组织切片中的去甲肾上腺素，在生物分子检测领域具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明涉及杂环化合物荧光探针，具体属于一种荧光素衍生物DCCT及其制备方法，以及该衍生物DCCT在脑组织切片去甲肾上腺素检测中的应用。

背景技术

去甲肾上腺素是交感神经系统中最重要的神经递质之一，在所有前脑活动如感知、记忆、学习和体内平衡中起着关键作用。去甲肾上腺素和与其结构类似的多巴胺和肾上腺素共存于交感神经系统。在神经元中，三种儿茶酚胺通过连续的酶促反应由酪氨酸合成，并以高浓度储存在酸性突触小泡(pH 5.0-5.5)中。

去甲肾上腺素功能障碍与神经退行性疾病和中枢神经系统疾病密切相关。例如，黑质中去甲肾上腺素能神经元的退化通常先于多巴胺能神经元的丢失。此外，去甲肾上腺素在临床中已被用作一线血管加压剂治疗休克。近年来，社会压力的增大等因素使得抑郁症患者数量激增。研究表明，五分之一的人在其一生中会经历重度抑郁症。目前，普遍认为重度抑郁症的内因是脑组织内去甲肾上腺素水平降低。对去甲肾上腺素的生理学和病理学作用研究受到越来越多的关注。发展荧光探针对脑组织中去甲肾上腺素分布的标记检测对其生理学和病理学作用研究具有重要的意义。

本发明提供了一种荧光素衍生物DCCT及其制备方法，并基于该衍生物DCCT实现了对脑组织中去甲肾上腺素的特异性检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种荧光素衍生物及其制备方法，以及该衍生物可作为检测试剂用于脑组织去甲肾上腺素的荧光检测；在检测去甲肾上腺素时选择性高，灵敏度高。

本发明提供的一种荧光素衍生物，中文名称为O，O'-(2'，7'-二氯荧光素-3'，6'-二基)S，S'-二-对-甲苯基双(碳酸酯)，英文名称为O,O'-(2',7'-dichlorofluorescein-3',6'-diyl)S,S'-di-p-tolylbis(carbonothioate)，缩写为DCCT，结构式为：

DCCT在PB/DMSO(v/v，1:1，pH 5.0)溶液中对去甲肾上腺素显示了优良的灵敏性和选择性，且检测过程简便。

DCCT的制备方法，包括如下步骤：

1)将4-甲基苯硫酚、三光气按摩尔比为2:1溶于二氯甲烷中，冰浴下逐滴加入与4-甲基苯硫酚等摩尔量的吡啶，于0℃反应1h后，混合物倒入水中，分液得有机相；有机相经水洗涤、干燥、浓缩得到S-(对甲苯基)碳酰氯，直接用于下一步合成；

2)将2'，7'-二氯荧光素、三乙胺按摩尔比为1:2溶于二氯甲烷中，冰浴下将步骤1)所得与三乙胺等摩尔量的S-(对甲苯基)碳酰氯的二氯甲烷溶液加入体系中，体系逐渐升温至室温并继续反应10h；体系减压蒸干后柱色谱分离(洗脱剂配比为乙酸乙酯:石油醚＝1:6)得到目标化合物DCCT。

本发明荧光素衍生物DCCT的用途：该衍生物可以在pH 5.0体系中对水环境和组织切片中的去甲肾上腺素特异性检测；所述的检测包含荧光检测和组织成像检测。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

1)所述荧光素衍生物合成简单，成本低廉，易于规模生产；