[发明专利]一种鉴定肺恶性肿瘤生物标记物的方法及其检测试剂盒

说明书

本发明提供了用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物及其应用。所述生物标记物为患者血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱(HPLC)得到的游离葡萄糖和甘露糖。本发明的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血进行HPLC仪分析便可区分正常入和患者，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速分析血清中游离的甘露糖和葡萄糖，并可以计算得到甘露糖、葡萄糖糖浓度及二者峰面积，对于研究血清游离甘露糖和葡萄糖与疾病之间的关系、寻找新型肺恶性肿瘤疾病临床检测的标志物有着非常重要的意义。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及用于鉴定肺恶性肿瘤的生物标记物及其检测应用。

背景技术

肺恶性肿瘤(也被称为肺癌)是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。其特征是肺组织中不受控制的细胞生长，主要包括小细胞肺癌(SCLC，～15％) 和非小细胞肺癌(NSCLC，～85％)。NSCLC可进一步分为组织学上分为腺癌(AC，～40％)，鳞状细胞癌(SC，～25％)，大细胞肺癌(LCC，～15％)和其他(～5％)罕见类型，包括腺体肿瘤，类癌和未分化癌。最常见的症状是咳嗽(包括咳血)，体重减轻，呼吸短促和胸痛。在大多数情况下，早期肺癌大多无症状，使早期诊断变得困难。目前肺癌的检测和诊断包括物理和生化方法。物理方法包括X射线，CT(计算机断层扫描)和PET(正电子发射断层扫描)/CT，可以显示肺部异常生长。这些方法也存在一些问题：①早期诊断缺乏敏感性，因为早期肿瘤通常太小而无法检测到；②由于这些方法在肺部检测到的一些可见肿块甚至不是肿瘤，因此假阳性率很高；③由这些方法产生的辐射导致额外癌症的高风险。由于生化检测方法具有较低的侵入性、低成本、操作简便等优势，临床上也使用了几种通过检测癌细胞或肺肿瘤释放到血清/血浆中的生物标志物来检测肺癌的生化方法。虽然在诊断和治疗方面取得一定进展，过去40年来肺癌的整体5年生存率仅上升了4％(从12％上升到16％)。由于接受肿瘤切除术的患者的生存率更高超过80％，科学家们预测在进入癌症无法治愈转移阶段之前的早期发现和诊断将大大减少肺肺癌的死亡率。建立可靠的肺癌早期诊断筛查方法仍然是理论和在实践中。如何精确识别肺恶性肿瘤的易感人群以便早期干预，或能否筛选合适的生物标志物以预测疾病治疗的效果或者预测疾病的进展等已成为热点问题。

血清中还原性单糖似乎仅限于甘露糖和葡萄。人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高，正常体检人群的范围为3.90～6.16mmol/L。目前，医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度，暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为 20～80μmol/L。甘露糖的含量约为葡萄糖含量的1％。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明，细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的游离甘露糖维持着血清中甘露糖的稳定。D-甘露糖是糖蛋白，细胞表面糖缀合物和糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白等结构中必需的单糖。其中，甘露糖是各种多糖复合物中N-糖链的重要组分，N-聚糖中的甘露糖残基来源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游离甘露糖是正常的血浆成分。目前，血清甘露糖的测定方法主要有酶法、气液色谱法、高分辨液相层析、气液色谱-质谱法和毛细管电泳法等。但这些方法均存在一定的不足之处。比如，使用酶法、气液色谱法和高分辨液相层析时，为避免高浓度的葡萄糖的影响需要将其去除，致使前处理过程比较繁琐；气液色谱-质谱法仪器价格昂贵，不适合常规目的；所需血清样本量大。目前没有文献报道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱法同时检测肺恶性肿瘤患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖。

因此，建立高效准确的血清中游离甘露糖的检测方法，对于研究血清游离单糖与疾病之间的关系、寻找疾病临床检测的标志物有着非常重要的意义。