[发明专利]一种鉴定退行性骨关节病生物标记物的方法及其试剂盒

说明书

本发明提供了一种鉴定退行性骨关节病的生物标记物的方法及其检测试剂盒。所述生物标记物为血清中经过柱前PMP衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖以及葡萄糖与甘露糖的比值。本发明检测方法为柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱法。本发明的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血即可，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速定量退行性骨关节病患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖，对于研究血清游离甘露糖及葡萄糖与退行性骨关节病之间的关系、寻找新型退行性骨关节病临床检测标志物有着非常重要的意义。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鉴定退行性骨关节病的生物标记物的方法及其检测试剂盒。

背景技术

退行性骨关节病是一种慢性的，是由于人体的衰老以及关节长期磨损导致的骨关节发生退化的关节疾病，又称骨关节炎、退行性关节炎，多见于中老年人群。该病的特征在于透明软骨逐渐恶化伴随着周围组织的变化包括韧带，滑膜和软骨下骨，导致关节或脊柱受影响，随着人口老龄化和预期寿命延长，骨关节疾病的负担会越来越重，因此寻找一种早期诊断方法尤其重要。

对于退行性骨关节病临床上主要靠一些症状和影像学的观察，通常是疾病已经发生到很严重的程度了，但是临床上用于诊断的血清标志物很少，目前还没有完全确切的血清标志物单独或联合起来可以准确地用于这些疾病的早期诊断，或准确反应这些疾病预后评估治疗情况，因此，寻找一种方便，无创伤的检测方法是十分必要的。而最理想的早期检测就是不需活检，且灵敏性和特异性高的血液分析。

人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高，正常人的范围为3.90～6.16mmol/L。目前，医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度，暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为20～80μmol/L。甘露糖的含量约为葡萄糖含量的1％。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明，细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的游离甘露糖维持着血清中甘露糖的稳定。D-甘露糖是糖蛋白，细胞表面糖缀合物和糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白等结构中必需的单糖。其中，甘露糖是各种多糖复合物中N-糖链的重要组分，N-聚糖中的甘露糖残基来源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游离甘露糖是正常的血浆成分。目前，血清甘露糖的测定方法主要有酶法、气液色谱法、高分辨液相层析、气液色谱-质谱法和毛细管电泳法等。但这些方法均存在一定的不足之处。比如，使用酶法、气液色谱法和高分辨液相层析时，为避免高浓度的葡萄糖的影响需要将其去除，致使前处理过程比较繁琐；气液色谱-质谱法仪器价格昂贵，不适合常规目的；所需血清样本量大。目前没有文献报道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱法同时检测退行性骨关节病患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖。

发明内容

本发明的目的是提供了用于鉴定退行性骨关节病的生物标记物及其应用，本发明采用柱前PMP衍生的高效液相色谱法(HPLC)检测退行性骨关节病患者血清中的单糖，尤其涉及血清中游离甘露糖和葡萄糖的检测。本发明的技术方案可以用于检测退行性骨关节病患者或正常人血清游离甘露糖和葡萄糖浓度，可以用于鉴定退行性骨关节病患者。

为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

用于鉴定退行性骨关节病的生物标记物，所述生物标记物为血清经过柱前PMP衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。

用于鉴定退行性骨关节病的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法，包括以下具体步骤：

(1)调节pH为7-14：取待检测的血清样品加超纯水于EP管中，加入氢氧化钠，涡旋混匀；

(2)PMP衍生：每个样品加入PMP，涡旋混匀，离心后置于烘箱反应；