[发明专利]一种鉴定支气管扩张症生物标记物的方法及其检测试剂盒

说明书

本发明提供了用于鉴定支气管扩张症的生物标记物及其应用。所述生物标记物为患者血清经过柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱(HPLC)得到的游离葡萄糖和甘露糖。本发明的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血进行HPLC仪分析便可区分正常人和患者，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速分析血清中游离的甘露糖和葡萄糖，并可以计算得到甘露糖、葡萄糖糖浓度及二者峰面积，对于研究血清游离甘露糖和葡萄糖与疾病之间的关系、寻找新型支气管扩张症疾病临床检测的标志物有着非常重要的意义。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及用于鉴定支气管扩张症的生物标记物及其检测应用。

背景技术

支气管扩张症(支扩，Bronchiectasis)是指细支气管不可逆性异常扩张的一种疾病。由于支气管及其周围肺组织慢性化脓性炎症和纤维化，使支气管壁的肌肉和弹性组织破坏，导致支气管变形及持久扩张。支气管扩张可能由多种感染性和后天性原因引起，包括肺炎，肺结核，免疫系统问题以及遗传性疾病囊性纤维化。典型的症状有慢性咳嗽、咳大量脓痰和反复咯血。在几乎所有病例中，囊性纤维化最终导致严重的支气管扩张。没有囊性纤维化的患者中有10-50％的原因尚不清楚。由于过度的炎症反应，涉及的气道(支气管)变得更大，从而更不能清除分泌物。这些分泌物会增加肺部细菌的数量，导致气道堵塞和气道进一步破裂。支气管扩张病程多呈慢性经过，可发生于任何年龄。这种疾病在女性中更常见，随着年龄的增长而增加。。支扩是多数疾病进展的终末结构改变，发病率为53～566/10万，且随着年龄的增加和诊断技术的提高发病率日趋升高。支扩病程长且复杂，临床表现多样，轻重程度不一，影响患者多方面，进一步加重基础疾病致肺功能下降，预后差，严重影响生活质量，病死率增加。CT影像技术是临床中比较常用的检查方法。目前日常诊疗对支扩的病因诊断和严重程度评估不够，应进一步重视分层诊断，及早识别高危患者，提出合理治疗方案。因此，建立可靠的支气管扩张早期诊断筛查方法具有较好的临床意义。如何精确识别支气管扩张的人群以便早期干预，或能否筛选合适的生物标志物以预测疾病治疗的效果或者预测疾病的进展等值得研究。

人体血清游离单糖中葡萄糖的含量最高，正常体检人群的范围为3.90～6.16mmol/L。目前，医院检验科可以直接通过测生化指标检测葡萄糖浓度，暂时不可以直接检测甘露糖浓度。健康成人血浆中游离甘露糖的浓度范围为20～80μmol/L。甘露糖的含量约为葡萄糖含量的1％。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明，细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的游离甘露糖维持着血清中甘露糖的稳定。D-甘露糖是糖蛋白，细胞表面糖缀合物和糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白等结构中必需的单糖。其中，甘露糖是各种多糖复合物中N-糖链的重要组分，N-聚糖中的甘露糖残基来源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游离甘露糖是正常的血浆成分。目前，血清甘露糖的测定方法主要有酶法、气液色谱法、高分辨液相层析、气液色谱-质谱法和毛细管电泳法等。但这些方法均存在一定的不足之处。比如，使用酶法、气液色谱法和高分辨液相层析时，为避免高浓度的葡萄糖的影响需要将其去除，致使前处理过程比较繁琐；气液色谱-质谱法仪器价格昂贵，不适合常规目的；所需血清样本量大。目前没有文献报道柱前1-苯基-5-甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱法同时检测支气管扩张症患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖。

因此，建立高效准确的血清中游离甘露糖的检测方法，对于研究血清游离单糖与疾病之间的关系、寻找疾病临床检测的标志物有着非常重要的意义。