[发明专利]一种鉴定冠心病生物标记物的方法及其检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种鉴定冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称，冠心病，CAD)的生物标记物的方法及其检测试剂盒。所述生物标记物为血清中经过柱前PMP衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。本发明检测方法为柱前1‑苯基‑5‑甲基吡唑啉酮(PMP)衍生的高效液相色谱法。本发明的技术方案具有前处理简单，分析时间短，仪器价格合理，符合常规使用，操作步骤简单易学，检测结果准确性高，只需采血便可区分正常人和CAD患者，并且所需血清量极少，采血量小于1mL等优点。所得结果显示此分析方法可以快速定量CAD患者血清中游离的甘露糖和葡萄糖，对于研究血清游离甘露糖及葡萄糖与CAD之间的关系、寻找新型CAD临床检测标志物有着非常重要的意义。

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种鉴定CAD的生物标记物的方法及其检测试剂盒。

背景技术

冠心病已成为危害全球范围内人群健康的最大威胁，也是导致人们死亡的主要原因之一。近些年来，虽然发达国家由冠心病引起的死亡率有所下降，但在中国等发展中国家中，冠心病的发病率和致死率仍在稳步上升，严重危害国人健康。大多数早期冠心病患者无明显症状，一旦发病可能发展为心肌梗死，猝死等急性疾病，因此合理的早期筛查是提高冠心病患者治愈率、提高患者生活质量的关键。目前对冠心病的诊断主要依靠心电图，冠状动脉造影及血管内成像技术，冠状动脉CT等影像技术。除此之外对血脂，血糖等指标的血液学检查也是评估是否存在冠心病的重要手段之一，心肌肌钙蛋白和C反应蛋白是实验室常用的主要血液临床诊断指标。但这些血液指标对冠心病的诊断只起到一定的辅助作用，仍需要借助影像、病理检查等结果来进一步确诊患者病情。而通过影像技术等手段确诊的患者，其冠状动脉部位往往已经出现了不同程度的狭窄，影响了患者冠心病的早期防治。因此人们仍亟需更好的有助于冠心病早期诊断及预后判定的血清生物学指标。

人体血清中还原性单糖似乎仅限于甘露糖和葡萄，其中葡萄糖(Glc)含量最高，正常范围为3.9～6.1mM，甘露糖(Man)含量约为葡萄糖含量的1％。真核细胞中，由14个单糖组成的寡糖(9个甘露糖，3个葡萄糖和2个N-乙酰葡糖胺)在内质网中转移到大多数新合成的蛋白质的N-糖链连接位点上。有研究报道，异常蛋白质糖基化与代谢性疾病、癌症等疾病有关。因此，测量人血清中游离单糖的含量将为包括系统性红斑狼疮在内的各种复杂疾病的诊断提供新型分子水平信息。

甘露糖的含量约为葡萄糖含量的1％。它大部分被认为是由细胞中的葡萄糖异构化而来。而近来有研究表明，细胞中流出的游离的甘露糖是哺乳动物血液中游离甘露糖的主要来源。这两部分来源的游离甘露糖维持着血清中甘露糖的稳定。D-甘露糖是糖蛋白，细胞表面糖缀合物和糖基化磷脂酰肌醇锚定蛋白等结构中必需的单糖。其中，甘露糖是各种多糖复合物中N-糖链的重要组分，N-聚糖中的甘露糖残基来源于血液中的葡萄糖或甘露糖。游离甘露糖是正常的血浆成分。目前，血清甘露糖的测定方法主要有酶法、气液色谱法、高分辨液相层析、气液色谱-质谱法和毛细管电泳法等。但这些方法均存在一定的不足之处。比如，使用酶法、气液色谱法和高分辨液相层析时，为避免高浓度的葡萄糖的影响需要将其去除，致使前处理过程比较繁琐；气液色谱-质谱法仪器价格昂贵，不适合常规目的；所需血清样本量大。

发明内容

本发明的目的是提供了用于鉴定CAD的生物标记物及其应用，本发明采用柱前PMP衍生的高效液相色谱法(HPLC)检测CAD患者血清中的单糖，尤其涉及血清中游离甘露糖和葡萄糖的检测。本发明的技术方案可以用于检测CAD患者或正常人血清游离甘露糖和葡萄糖浓度，可以用于鉴定CAD患者。

为实现本发明的目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

用于鉴定CAD的生物标记物，所述生物标记物为血清经过柱前PMP衍生的高效液相色谱得到的游离甘露糖和葡萄糖。

用于鉴定CAD的生物标记物的定量分析方法，其特征在于：该方法为柱前PMP衍生的高效液相色谱法，包括以下具体步骤：