[发明专利]一种可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条及制备方法

权利要求书

1.一种可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其包括样品垫、量子垫、硝酸纤维素膜、吸水纸和衬板，其特征在于：所述的量子垫上包被有碳量子点标记的C反应蛋白抗体，所述的硝酸纤维素膜上自所述的样品垫所在侧向着所述的吸水纸所在侧依次设置有检测线和质控线，所述的检测线上包被有识别C反应蛋白的单克隆抗体，所述的质控线上包被有羊抗鼠IgG。

2.根据权利要求1所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的碳量子点的最大粒径小于12nm。

3.根据权利要求1所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的碳量子点标记的C反应蛋白抗体由碳量子点标记的亲和素与生物素标记的C反应蛋白抗体偶联形成。

4.根据权利要求3所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的碳量子点与所述的亲和素的投料质量比为1：0.15~0.25。

5.根据权利要求3所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的生物素标记的C反应蛋白抗体通过向C反应蛋白抗体中投加生物素溶液制得，其中，所述的生物素与所述的C反应蛋白抗体的质量比为15~25：1，所述的C反应蛋白抗体和所述的生物素溶液的投料体积比为1：0.01~0.02。

6.根据权利要求3所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的碳量子点标记的亲和素与所述的生物素标记的C反应蛋白抗体的投料质量比为0.3~0.5：1。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的碳量子点标记的C反应蛋白抗体通过如下步骤制备得到：

（1）将葡萄糖溶液在170~190℃下进行水热反应10~30h，冷却后，用超声波震荡处理30~40min，然后经过滤得到碳量子点溶液；

（2）将所述的碳量子点溶液、聚乙二醇和水按体积比为2~3:0.5~0.7:1的比例混合，超声处理30~40min，然后在170~190℃下钝化25~35h；

（3）将钝化后的碳量子点溶液、PBS缓冲液和EDC盐酸盐混合均匀，然后加入链霉亲和素，在10~30℃下搅拌反应2~4h，经硅胶柱层析、PBS缓冲液洗脱、分离纯化得到碳量子点标记的亲和素；

（4）将C反应蛋白抗体和PBS缓冲液混合离心后，加入生物素溶液和PBS缓冲液，37℃避光温育0.5~1h，经离心后，多次加入PBS缓冲液并离心，然后加入Tris保存液，经吹打离心后，得到生物素标记的C反应蛋白抗体溶液；

（5）将步骤（3）得到的碳量子点标记的亲和素和步骤（4）得到的生物素标记的C反应蛋白抗体溶液混合得到所述的碳量子点标记的C反应蛋白抗体。

8.根据权利要求1所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的试纸条还包括能够容纳所述的样品垫、所述的量子垫、所述的硝酸纤维素膜、所述的吸水纸和所述的衬板的下壳，盖设在所述的下壳上的上壳开设在所述的上壳上能够向所述的样品垫上滴加样品的加样孔，开设在所述的上壳上能够看到所述的检测线和所述的质控线的观察窗。

9.根据权利要求1所述的可定量检测末梢血中C反应蛋白含量的试纸条，其特征在于：所述的样品垫和所述的量子垫由经过表面活性剂处理的玻璃纤维组成。

10.一种如权利要求1至9中任一项所述的试纸条的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）将碳量子点标记的C反应蛋白抗体以0.8~1.2μL/cm的量喷涂在量子垫上，干燥制得包被有碳量子点标记的C反应蛋白抗体的量子垫；

（2）将硝酸纤维素膜粘贴到所述的衬板上，将CRP抗体用印膜缓冲液稀释成0.8~1.2mg/mL，将羊抗鼠IgG用印膜缓冲液稀释成0.8~1.2mg/mL，然后分别以0.8~1.2μL/cm的量喷涂在所述的硝酸纤维素膜上，干燥得到含有质控线和检测线的硝酸纤维素膜；其中，所述的印膜缓冲液包括浓度为0.01~0.03mol/L、pH7~7.4的PBS缓冲液、质量百分浓度为0.8~1.2%的海藻糖、浓度为8~12mmol/L的乙二胺四乙酸、质量百分浓度为0.08~0.12%的proclin300；

（3）将吸水纸的一端与衬板的一端对齐，吸水纸的另一端压在所述的硝酸纤维素膜的一端上，且压住1~1.5mm；将量子垫的一端压在所述的硝酸纤维素膜的另一端上，且压住0.5~1mm；将样品垫的一端压在所述的量子垫的另一端上，且压住1.5~2mm，将样品垫的另一端与衬板的另一端对齐。