[发明专利]一种类芽孢杆菌甲壳素酶及其应用在审
| 申请号： | 201811315015.1 | 申请日： | 2018-11-06 |
| 公开（公告）号： | CN109652395A | 公开（公告）日： | 2019-04-19 |
| 发明（设计）人： | 娄文勇;徐培;宗敏华;程建华;杨继国 | 申请（专利权）人： | 华南理工大学 |
| 主分类号： | C12N9/42 | 分类号： | C12N9/42;C12P19/14;C12P19/04;C12P19/00 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 何淑珍;冯振宁 |
| 地址： | 510640 广东省广州市*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甲壳素酶 芽孢杆菌 蟹壳粉 大肠杆菌表达系统 离子液体预处理 协同 应用 氨基酸序列 混合酶溶液 可溶性表达 催化过程 工业应用 核酸序列 酶解过程 酶解效率 协同催化 单一酶 水解 催化剂 基因 | ||
1.一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，所述类芽孢杆菌甲壳素酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1 所示。
2.根据权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，编码该类芽孢杆菌甲壳素酶的基因的核酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根据权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，制备该类芽孢杆菌甲壳素酶的方法包括以下步骤：
将SEQ ID NO.2 所示的类芽孢杆菌甲壳素酶基因与表达载体连接，构建重组载体，然后将重组载体转入表达菌株中，诱导并获得可胞内可溶性表达的类芽孢杆菌甲壳素酶。
4.根据权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，所述表达载体为pET-22b,pET-28a及pET-30a中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，所述表达菌株为大肠杆菌BL21(DE3)。
6.根据权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶，其特征在于，所述诱导是在添加了0.1-1.0 mM IPTG的LB液体培养基中，温度为16-30℃下诱导16-24h。
7.权利要求1所述的一种类芽孢杆菌甲壳素酶的应用，其特征在于，包括以下步骤：
以两种甲壳素酶混合成的酶液为催化剂，以预处理后的蟹壳粉为底物，双酶协同水解蟹壳粉制备可溶性的甲壳寡糖；其中，两种甲壳素酶包括类芽孢杆菌甲壳素酶
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述类芽孢杆菌甲壳素酶
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述甲壳素酶总用量为0.1-0.2mg，预处理后的蟹壳粉的用量为10-30mg。
10.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述酶解的时间为1-24h，酶解的温度为30-50℃。
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