[发明专利]ROS响应的基因递送载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种ROS响应的基因递送载体，其特征在于，所述基因递送载体由缩硫酮linker与基于POSS三代赖氨酸星型阳离子聚合物POSS-G3交联而成，其结构式为：

上述结构式中，n ≥ 1；

所述缩硫酮linker的结构式为：

；

所述基因递送载体的制备方法为：将缩硫酮linker和N-羟基琥珀酰亚胺混合，在氮气保护和搅拌下将1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺缩合剂溶液逐滴加至混合溶液中，反应生成活性中间体；

所述活性中间体用溶剂溶解形成溶液，将活性中间体溶液和POSS-G3的二甲基亚砜溶液加入反应容器反应，之后用真空泵抽去溶解活性中间体的溶剂，再充入氮气搅拌反应，反应完毕经透析纯化、冷冻干燥得到胶状的基因递送载体；

所述缩硫酮linker制备方式为：将3-巯基丙酸和对羟基苯甲醛溶解于乙酸乙酯中，加入三氟乙酸作为催化剂，室温反应直至对羟基苯甲醛消耗完毕，将溶剂旋干后，用二氯甲烷和冰水洗涤粗反应产物，真空干燥获取产物缩硫酮linker；

所述POSS-G3制备方式为：

将浓盐酸和3-氨基丙基三乙氧基硅烷分别加入甲醇溶液中加热回流，反应完毕后，用四氢呋喃洗涤，干燥得八氨基笼状聚倍半硅氧烷，即八氨基POSS；

称取八氨基POSS、1-羟基苯并三唑、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯溶解于无水二甲基亚砜中，逐滴加入过量溶解于无水二甲基亚砜中的Boc-Lys(Boc)-OH，即(S)-2,6-二叔丁氧羰基氨基己酸反应；然后加入N,N'-二异丙基乙胺，在室温下反应；反应完毕加入等体积三氯甲烷，之后用无水氯化钠洗涤三次，用无水硫酸镁干燥，将粗产物浓缩后用乙腈沉淀，干燥后得POSS-G1-Boc；将POSS-G1-Boc溶解于二氯甲烷，之后加入过量三氟乙酸，在室温下反应后，旋蒸，乙醚沉淀，除去乙醚得到白色粉末POSS-G1；重复POSS-G1的合成步骤，合成得到白色粉末POSS-G3。

2.根据权利要求1所述的ROS响应的基因递送载体，其特征在于，所述溶解活性中间体的溶剂为无水二氯甲烷、无水四氢呋喃或无水二甲亚砜中的至少一种。

3.权利要求1所述基因递送载体在基因递送中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述基因递送载体以复合物的形式进行基因递送，所述复合物组成包括：

组分（1）：权利要求1所述的基因递送载体；和

组分（2）：在真核细胞中表达的质粒DNA；

带正电的组分（1）与带负电的组分（2）结合，形成所述复合物。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述组分（1）和组分（2）的N/P比值为：组分（1）：组分（2）= 10 ~ 100。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述组分（1）和组分（2）的N/P比值为：组分（1）：组分（2）= 40。

7.根据权利要求5~6所述的应用，其特征在于，所述复合物的粒径 ≤ 200 nm。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述复合物的粒径为107.5 nm。