[发明专利]一种检测癌胚抗原的无标记电化学发光适配体传感器及其制备方法和使用方法

权利要求书

1.一种检测癌胚抗原的无标记电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于，步骤如下：

（1）Au-Ag/g-C₃N₄纳米复合材料的制备

向三颈瓶中加入g-C₃N₄纳米片，经磁力搅拌得到均匀的g-C₃N₄悬浮液，向g-C₃N₄悬浮液中加入0.1 M的氯金酸溶液和0.1 M 的硝酸银溶液，加热至沸腾后迅速加入0.1 mM硼氢化钠和0.5 mM柠檬酸钠的混合溶液，继续加热回流10-20min后，搅拌条件下自然冷却至室温，离心洗涤干燥得Au-Ag/g-C₃N₄纳米复合材料，然后重新分散在10mL超纯水中，得Au-Ag/g-C₃N₄复合纳米材料溶液；

（2）无标记电化学发光适配体传感器的制备

a. 将直径为2.5-3.5mm的玻碳电极依次用1.0、0.3、0.05 μm的三氧化二铝抛光粉处理，将电极表面打磨成镜面，在乙醇和纯水中依次清洗并在红外灯下烤干；

b. 将经步骤a处理的玻碳电极表面滴加2 μL的Au-Ag/g-C₃N₄复合纳米材料溶液，并在室温下自然晾干；

c. 将经步骤b处理的玻碳电极浸泡到1-2μM的癌胚抗原适配体溶液中，于4℃条件下过夜培育；

d. 取出经步骤c处理的电极，经0.1 M、pH=7.4的PBS溶液清洗后，浸泡在0.1 mM的2-巯基乙醇中，培育30min后用0.1 M、pH=7.4的 PBS溶液清洗，即得检测癌胚抗原的无标记电化学发光适配体传感器；

所述无标记电化学发光适配体传感器通过将Au/Ag合金附着在g-C₃N₄二维纳米片上形成Au-Ag/g-C₃N₄ 纳米复合材料，以Au-Ag/g-C₃N₄ 纳米复合材料作为基底修饰玻碳电极，然后将癌胚抗原适配体通过Au-S和Ag-S共价健与Au-Ag/g-C₃N₄ 纳米复合材料结合，即得检测癌胚抗原的无标记电化学发光适配体传感器；

所述癌胚抗原适配体为巯基适配体、序列为5’-SH-AGGGGGAAGGGATACCC-3’。

2.如权利要求1所述的检测癌胚抗原的无标记电化学发光适配体传感器的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中每1mg g-C₃N₄纳米片中加入10-15μL的氯金酸溶液、6-10μL的硝酸银溶液、4-10μL硼氢化钠溶液和45-55 μL 柠檬酸钠溶液。

3.采用如权利要求1所述的制备方法制得的电化学发光适配体传感器检测人体血清中癌胚抗原的方法，其特征在于，所述检测方法步骤为：

1）将无标记电化学发光适配体传感器浸泡于一系列浓度为1 fg、10 fg、100 fg、1 pg、10 pg、100 pg、1 ng的癌胚抗原溶液中，37 ℃培育90 min后取出并用0.1 M、pH=7.4的PBS溶液清洗，得无标记癌胚抗原电化学发光适配体传感器，保存于4℃冰箱中备用；

2）将步骤1）得到的无标记癌胚抗原电化学发光适配体传感器作为工作电极，用饱和甘汞电极作为参比电极、铂丝电极作为对电极，在0.1M、pH=7.4的PBS溶液中进行电化学发光检测，根据所得的电化学发光信号强度猝灭值与癌胚抗原的标准溶液之间的关系，绘制工作曲线；

3）以稀释1000倍的待测人体血清代替癌胚抗原的标准溶液，按照步骤1）、2）的操作进行检测，将检测出来的电化学发光信号强度猝灭值带入步骤2）得到的工作曲线，即得到人体血清中癌胚抗原的浓度；

所述步骤2）中0.1 M、pH=7.4的PBS溶液中包含5×10^-5 M luminol和5×10^-6 M H₂O₂溶液。