[发明专利]一种基于铜离子增敏的腺嘌呤和鸟嘌呤电化学检测方法

说明书

本发明公开了一种基于铜离子增敏的腺嘌呤和鸟嘌呤电化学检测方法。利用铜丝和铅笔制备铅笔芯电极，对其进行电极氧化预处理。在铜离子存在的情况下，以处理过的铅笔芯电极作为工作电极，Ag/AgCl电极为参比电极，铂丝电极为辅助电极，利用差分脉冲伏安法在pH4.5醋酸缓冲溶液中对腺嘌呤和鸟嘌呤进行检测。在不同的富集时间，pH值以及铜离子浓度等条件下研究了鸟嘌呤和腺嘌呤的电化学信号，鸟嘌呤和腺嘌呤的峰电流在5~40mg/L的浓度范围内线性关系良好，其相关系数分别为0.9920和0.9928，检出下限为5mg/L。本发明简单、检测速度快、成本低廉，且能够实现对腺嘌呤和鸟嘌呤高灵敏度检测。

技术领域

本发明涉及一种基于铜离子增敏的腺嘌呤和鸟嘌呤电化学检测方法，属于生物化学领域。

背景技术

鸟嘌呤(Guanine，G)和腺嘌呤(Adenine，A)是DNA和RNA中重要的碱基，在酶催化的信号传递、代谢调节、能量供应以及组成辅酶等方面都起到很重要的作用。当人体内的嘌呤代谢发生絮乱时，通常表明人体的免疫力下降，导致免疫系统发生突变或者基因有缺陷，伴随而来的疾病，如SARS、禽流感、埃博拉等病毒，这些病毒严重危害人类的身体健康，导致社会的秩序极度不稳定。因此，建立一种简单、快捷、灵敏度高的方法来测定鸟嘌呤和腺嘌呤含量具有非常重要的意义。

电化学方法是一种简便、快捷、成本低的鸟嘌呤(G)和腺嘌呤(A)检测方法。目前，修饰电极在鸟嘌呤和腺嘌呤检测中应用最为广泛。例如：夏雅琳等制备的掺硼碳纳米管(BCNTs)/GC电极，其电化学氧化行为与GC和CNTs/GC电极相比，具有更好的峰形，峰电流也明显增大且具有良好的重现性；Yin等研究的石墨烯-Nafion复合膜电极；Yang等报道的基于TiO2-石墨烯纳米复合物修饰电极。

以上报道的修饰电极的制备过程相对比较繁琐，涉及到材料的合成、修饰等过程，成本较高。国内用铅笔芯电极来测定鸟嘌呤(G)和腺嘌呤(A)等嘌呤碱基的报道比较少，铅笔芯作为工作电极，测定嘌呤碱基是一种较为新颖的方法，而且铅笔芯价廉易得，电极处理方便简捷。Percio A.M.Farais等报道了在铜离子存在下，利用溶出伏安法测定超痕量腺嘌呤(A)取得成功，也为铅笔芯电极来测定鸟嘌呤和腺嘌呤等嘌呤碱基提供了必要的条件。

发明内容

本发明的目的是提供一种基于铜离子增敏的腺嘌呤和鸟嘌呤电化学检测方法。

具体步骤为：

(1)鸟嘌呤标准溶液的配制：准确称取0.1g鸟嘌呤固体粉末，用浓度为0.2mol/L的NaOH溶液溶解，配成浓度为1g/L鸟嘌呤标准溶液，4℃保存。

(2)腺嘌呤标准溶液的配制：准确称取0.1g腺嘌呤固体粉末，用浓度为0.2mol/L的NaOH溶液溶解，配成浓度为1g/L腺嘌呤标准溶液，4℃保存。

(3)铅笔芯电极的制备:用铜丝绑在自动铅笔的内部铜质部分，拧紧，使其接触良好，再将铅笔芯装入自动铅笔中，电极夹夹住铜丝，即得到铅笔芯电极。

(4)铅笔芯电极预处理：将铅笔芯电极与铂丝电极、Ag/AgCl电极组成的三电极系统，置于10mL浓度为0.2mol/L pH4.5的醋酸缓冲溶液中，在1.6V电位下溶出氧化180秒，于0.3～1.5V电压内进行循环伏安扫描，扫描5～10段，待循环伏安曲线稳定，取出处理好的铅笔芯电极，用蒸馏水冲洗备用。