[发明专利]一种血清中胆固醇的检测方法

权利要求书

1.一种非诊断治疗目的的血清中胆固醇的检测方法，其特征在于：包括如下步骤：

（1）将β-CD@AuNPs、CQDs和适量以无水乙醇为溶剂制备的胆固醇储备液混合后，获得含不同浓度的胆固醇标准溶液的混合溶液；将荧光激发波长固定在390 nm，分别记录含不同浓度的胆固醇标准溶液的混合溶液的荧光发射光谱，以荧光发射峰Em=528 nm的强度作为定量依据，以荧光恢复效率（F-F₀）/F₀对不同胆固醇浓度做线性拟合，测定检测限， F₀为不加胆固醇的荧光发射峰Em=528 nm的强度，F对应不同胆固醇标准溶液的浓度的荧光发射峰Em=528 nm的强度；当胆固醇浓度为10-210 μmol·L^-1时，荧光恢复效率（F-F₀）/F₀与胆固醇浓度呈现良好的线性关系，获得线性工作曲线y=0.0052x-0.0139，R²=0.996，y=（F-F₀）/F₀，x为胆固醇浓度；上述β-CD@AuNPs是以氯金酸（HAuCl₄）溶液为前驱体，以β-环糊精（β-CD）为还原剂和稳定剂，加热回流一步制备而成，上述CQDs是以氯化十六烷基吡啶（CPC）溶液为前驱体，通过超声一步法合成；

（2）将新鲜血液于室温下保存过夜，隔天取其中淡黄色的上清液离心，获得血清；在上述血清中加入0~160μmol·L^-1的胆固醇标准溶液，根据步骤（1）的参数进行荧光测定，重复测定至少三次，获得相应的荧光发射峰Em=528 nm的强度；

（3）将步骤（3）获得的荧光发射峰Em=528 nm的强度代入上述线性工作曲线中，获得血清中的胆固醇浓度；

所述β-CD@AuNPs的制备方法为：反应容器中先后加入 35mL超纯水， 5mL 0.1 mol·L^-1且 pH 7.0的PBS缓冲液，1mL 0.01 mol·L^-1的HAuCl₄溶液和10mL 0.01 mol·L^-1的β-CD水溶液，搅拌均匀后，移入油浴锅中，在100℃下强力搅拌回流60 min，溶液颜色由浅黄色变成浅红色最终变为葡萄酒红，待溶液自然冷却后，经0.45 μm滤膜过滤后于4℃下保存；

所述CQDs的制备方法为：往100 mL 15mmol·L^-1的CPC溶液中加入9 mL 2.0 mol·L^-1的NaOH溶液，在超声30 min后，用浓盐酸调节溶液pH值至7.0，使反应终止，再经透析袋透析24h后，冷冻干燥得到CQDs固体，根据实验需要的浓度将CQDs固体重新溶解于水，4℃保存；超声期间溶液颜色由无色变成浅黄最终变成棕黄色。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述β-CD@AuNPs的平均粒径为24-26nm。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述CQDs的平均粒径为2.8-3.2nm。