[发明专利]微生物腐熟剂的制备方法及其在降低畜禽粪便抗生素残留中的应用

权利要求书

1.微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于该方法包括如下工艺步骤：

A、将地衣芽孢杆菌Bacillus licheniformis CGMCC No.16551接种于含有碳源、氮源和营养物质的培养基中发酵制成发酵液；

B、将步骤A中制备的发酵液制成地衣芽孢杆菌菌粉；

C、将步骤B中制成的地衣芽孢杆菌粉添加到CN101905985A中制成的腐熟剂内制成混合物，然后向混合物中添加蛋白酶和纤维素酶混合均匀，制得微生物腐熟剂。

2.根据权利要求1所述的微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于所述的步骤B是向步骤A中制备的发酵液内加入质量百分含量为3.0％-4.0％的磷酸二氢钠作为保护剂，在50-100转/分钟转速条件下搅拌1-1.5小时；再加入质量百分含量为3.0％-4.0％的氯化钙，在50-100转/分钟转速条件下搅拌1-1.5小时，絮凝菌体，添加载体轻质碳酸钙后经喷雾干燥制成菌粉。

3.根据权利要求1或2所述的微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于所述的步骤C中蛋白酶的添加量为400U/g-600U/g，纤维素酶的添加量为50U/g-150U/g。

4.根据权利要求1所述的微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于所述的步骤A中的地衣芽孢杆菌的发酵包括如下步骤：

将地衣芽孢杆菌经过扩大培养后，将地衣芽孢杆菌种子接种于发酵培养基进行通气发酵。

5.根据权利要求1或4所述的微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于所述步骤A中的地衣芽孢杆菌的扩大培养及通气发酵包括如下工艺步骤：

Ⅰ、由试管斜面菌种制备克氏瓶斜面种子

将试管斜面菌种接种到克氏瓶斜面种子培养基中制备克氏瓶种子，其中试管斜面菌种的培养条件为：试管斜面种子培养基选用肉汤培养基，在温度40℃-45℃的条件下恒温培养36-48小时制成试管斜面菌种；克氏瓶斜面种子的培养条件为：按每瓶60-80ml的量将克氏瓶斜面种子培养基装入250ml克氏瓶中，在温度40℃-45℃的条件下恒温培养36-48小时制成克氏瓶斜面种子；

Ⅱ、将克氏瓶斜面种子接种到发酵培养基中发酵

取步骤Ⅰ中制得克氏瓶斜面种子2-3个，每瓶加无菌水50-100ml制成菌悬液，采用火环或压差法将菌悬液接种到发酵罐内灭菌后的发酵培养基中进行发酵；

发酵过程的工艺条件为：发酵温度40℃-45℃，通风量为：0-4小时0.3vvm-0.5vvm，4-8小时0.7vvm-0.9vvm，8-20小时1.0vvm-1.2vvm，20小时后0.8vvm-1.0vvm，发酵过程中搅拌转速为150-250转/分钟；发酵至当不低于95％的营养体形成芽孢时即可终止发酵。

6.根据权利要求5所述的微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于所述的步骤Ⅰ中的克氏瓶斜面种子培养基由如下单位质量份的组分组成：

葡萄糖0.3-1；蛋白胨0.5-1；磷酸氢二钾0.5-1；硫酸铵0.1-0.5；酵母膏0.3-0.5；硫酸镁0.1-0.5；琼脂15-22；水1000；pH＝7.2。

7.根据权利要求5所述的微生物腐熟剂的制备方法，其特征在于所述的步骤Ⅱ中的发酵培养基由如下质量百分含量的原料组成：

淀粉0.3％-1.0％；豆饼粉0.03％-0.1％；碳酸钙0.1％-0.2％；蔗糖0.1％-0.5％；硫酸铵0.05％-0.15％；磷酸氢二钾0.1％-0.5％；硫酸镁0.08％-0.3％；酵母膏0.03％-0.15％；氢氧化钾0.01％-0.05％；消泡剂0.005％-0.02％；余量为自来水；pH＝7.2-7.4。

8.根据权利要求1-7所述的微生物腐熟剂在降低畜禽粪便抗生素残留中的应用。

9.根据权利要求8所述的微生物腐熟剂在降低畜禽粪便抗生素残留中的应用，其特征在于包括如下工艺步骤：

a、将禽畜粪便和纤维类物质按照C/N比＝25-35：1的比例混合，按物料总重的0.5％-1.5％添加硫酸铵，调pH值到中性，调节水分至45％-55％；其中禽畜粪便选用新鲜牛粪、猪粪、羊粪、鸡粪中的一种或两种以上的混合物；纤维类物质选用花生秧、玉米秸秆、棉花秸秆中的一种或两种以上的混合物；

b、将步骤a中混合好的物料投入发酵槽，堆成料堆；

c、按0.4％-0.6％的比例向步骤b制成的料堆中加入微生物腐熟剂，混合均匀后开始发酵，当料堆温度达到80℃维持3天后开始第一次翻堆，温度再次达到80℃，维持2-3天开始第二次翻堆，温度下降到40℃结束发酵。