[发明专利]一种蜚蠊内生放线菌的抗真菌活性筛选方法及其发酵方法在审
| 申请号： | 201811291390.7 | 申请日： | 2018-10-31 |
| 公开（公告）号： | CN109280692A | 公开（公告）日： | 2019-01-29 |
| 发明（设计）人： | 金小宝;褚夫江 | 申请（专利权）人： | 广东药科大学 |
| 主分类号： | C12Q1/18 | 分类号： | C12Q1/18;C12N1/20 |
| 代理公司： | 广州胜沃园专利代理有限公司 44416 | 代理人： | 徐晶 |
| 地址： | 510006 广东省广州市番*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 放线菌 蜚蠊 抗真菌活性 筛选 发酵 发酵液上清液 冷却 抗真菌活性物质 液体发酵培养基 白色念珠菌 发酵培养基 环境微生物 一级种子液 制备菌悬液 种子培养基 恒温培养 菌块接种 菌株接种 扩大生产 摇瓶发酵 培养基 单菌落 混悬液 牛津杯 抑菌圈 肠道 真菌 菌株 接种 测量 转入 参考 观察 | ||
1.一种蜚蠊肠道内生放线菌的抗真菌活性筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
A、将经过分离纯化的蜚蠊内生放线菌单菌落重新接种至培养基内，培养5-7天后，挑取5×5mm的菌块，接种于种子培养基中培养3天，然后制备菌悬液，振荡混匀，得一级种子液；
B、将步骤A所得一级种子液转入液体发酵培养基中，置于摇床上培养5天，摇瓶发酵后，离心，得发酵液上清液；
C、将经过高压灭菌的PDA培养基冷却至45℃左右，加入适量新鲜制备的白色念珠菌混悬液，混匀后，采用双层倒板法均匀倒入平板上，冷却至室温；将牛津杯均匀放在平板上，加入步骤B所得的发酵液上清液，培养3-4天后，观察并测量抑菌圈直径。
2.根据权利要求所述的一种蜚蠊肠道内生放线菌的抗真菌活性筛选方法，其特征在于，所述步骤C可由以下步骤代替：
将步骤B所得发酵液上清液接种至经过高压灭菌的PDA固体培养基的边缘，培养3-4天，分别将红色毛癣菌、黑曲霉、烟曲霉点接至固体培养基中央，恒温培养4-5天后，观察抗真菌情况。
3.一种蜚蠊肠道内生放线菌的发酵方法，其特征在于，步骤如下：将菌株接种于发酵培养基中，恒温培养5～7天。
4.根据权利要求3所述的一种蜚蠊肠道内生放线菌的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基为ISP2液体发酵培养基。
5.根据权利要求3所述的一种蜚蠊肠道内生放线菌的发酵方法，其特征在于，所述菌株的接种量为8％。
6.根据权利要求3所述的一种蜚蠊肠道内生放线菌的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的初始pH为8.0。
7.根据权利要求3所述的一种蜚蠊肠道内生放线菌的发酵方法，其特征在于，所述发酵培养基的装液量为210mL/300mL。
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