[发明专利]利用乳化法制备解磷微生物缓释海藻酸钠微球的方法

权利要求书

1.利用乳化法制备解磷微生物缓释海藻酸钠微球的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(a)以低品位磷矿粉为驯化剂，对磷矿矿区微生物菌群或农田土壤微生物菌群进行筛选、富集、驯化，得到目标解磷微生物菌群备用；

筛选过程具体如下：按照50-100g：1L的比例将磷矿矿区土壤或农田土壤与无菌水混合，搅拌均匀后取上层浑浊液，依次用纱布、滤纸过滤多次，所得滤液即为筛选好的初始菌液；

富集过程具体如下：将体积比为8-30:1的富集培养基和筛选好的初始菌液置于培养器中，在28-30℃下恒温振荡培养3-5天，取第一次培养后的菌悬液按照同样的方法重复培养3-4次，得到富集好的解磷微生物菌群悬浮液；

驯化过程具体如下：将体积比为5-15:1的驯化培养基和富集好的解磷微生物菌群悬浮液置于培养器中，在28-30℃下恒温振荡培养3-5天，取第一次驯化培养后的菌悬液按照同样的方法重复驯化培养3-4次，在此过程中逐渐提高驯化培养基中低品位磷矿的含量，最终得到目标解磷微生物菌群；

(b)将培养好的目标解磷微生物菌群加入到海藻酸钠溶液中，得到解磷微生物菌群-海藻酸钠混合溶液；

(c)配制W/O型反向乳液：将液体石蜡加入到乳化剂中搅拌均匀即可，所述乳化剂选自吐温80、司盘80、蔗糖硬脂酸酯或其他非离子型乳化剂中的一种或几种；

(d)按照1:2-10的体积比将微生物菌群-海藻酸钠混合溶液加入到W/O型反向乳液中，超声搅拌10-60min，再加入质量分数为0.1％-10％且相当于W/O型反向乳液体积0.4-1.0倍的CaCl₂溶液后以100-400rpm的转速搅拌10-60min，接着静置10-40min后加入有机溶剂，以5000-8000g的离心力进行离心，分离得到下层微球，反复用有机溶剂和无菌水洗涤3-6次，最后在-50℃至-30℃环境下冷冻干燥6-10h，得到解磷微生物缓释海藻酸钠微球；所述有机溶剂选自石油醚、丙酮、乙酸乙酯中的一种或几种。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述富集培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖10.0份，(NH₄)₂SO₄ 0.1份，MgSO₄或其水合物0.25份，KCl 0.2份，MgCl₂或其水合物0.5份，Ca₃(PO₄)₂ 1份，蒸馏水1000份，pH＝7.0；所述驯化培养基按照重量份数计的配方为：葡萄糖10.0份，(NH₄)₂SO₄ 0.1份，MgSO₄或其水合物0.25份，KCl 0.2份，MgCl₂或其水合物0.5份，低品位磷矿粉1-5份，蒸馏水1000份，pH＝7.0。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(a)中所得目标解磷微生物菌群为混悬液或者冷冻离心后的菌泥。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(b)中解磷微生物菌群-海藻酸钠混合溶液中海藻酸钠的质量分数为0.5％-3％，目标解磷微生物菌群与海藻酸钠的质量比为1:5-10；步骤(c)中乳化剂和液体石蜡的体积比为1:10-50。

5.权利要求1-4任意一项制得的解磷微生物缓释海藻酸钠微球作为微生物肥料的应用。