[发明专利]利用4-O-去甲基巴尔巴地衣酸合成2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯的方法

说明书

本发明提供了一种利用4‑O‑去甲基巴尔巴地衣酸合成2,4‑二羟基‑3,6‑二甲基苯甲酸甲酯(即合成橡苔)的方法，涉及化学合成技术领域，技术方案为：采用酸水解或碱水解的方法，将4‑O‑去甲基巴尔巴地衣酸水解为2,4‑二羟基‑3,6‑二甲基苯甲酸；以2,4‑二羟基‑3,6‑二甲基苯甲酸为底物采用甲基化试剂进行甲酯化反应，反应结束后处理即可得到2,4‑二羟基‑3,6‑二甲基苯甲酸甲酯(合成橡苔)。采用新的中间体两步合成合成橡苔，简化了合成工艺。

技术领域

本发明涉及化学合成技术领域，具体涉及一种利用4-O-去甲基巴尔巴地衣酸合成2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(即合成橡苔)的方法。

背景技术

橡苔是一种稀有的地衣资源，一般指生长在橡树树干和枝条上的松萝科扁枝衣属的栎扁枝衣，橡苔浸膏和精油被广泛应用于香水、护肤品、香烟和熏香等日用品，同时，橡苔也作为食品添加剂应用于饮料、烘焙食品、布丁、软糖等。天然橡苔主要产自于欧洲中南部和北非一代地中海沿岸国家，如法国、意大利等。我国橡苔资源极其稀少，仅在云南开发了橡苔I号和II号，由于地衣原料不同使得香气有很大的区别，主要作为烟草香精使用。

橡苔浸膏和精油作为一种天然产物制品，其市场和应用存在一些先天不足。首先，天然橡苔资源稀缺，售价高昂。其次，由于原料来源、提取工艺的差异使得橡苔品质不一，而且企业为降低成本会对产品进行调配，使得市场混乱。另外，天然橡苔浸膏和精油是一种混合物，成分复杂，其中部分化合物已被认定为过敏原，欧盟化妆品法规对这些致敏原物质的使用作出了规定和限制。上述不利因素都限制了橡苔的市场应用，因此，鉴定天然橡苔的主要呈香化合物并开发其生产工艺受到了企业和科研人员的关注。研究表明2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(1CAS:4707-47-5)是橡苔中的主香化合物，因此该化合物被称为合成橡苔。关于合成橡苔的化学合成路线已经有文献和专利报道，其中大部分合成路线中都是以不同原料合成关键中间体2,5-二甲基间苯二酚(2CAS:488-87-9)和2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸(3CAS:4707-46-4)最后生成2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯，制备过程如图1所示。但是，在实际生产中，这两个关键中间体的制备工艺复杂，并且收率较低、成本较高，因此采用化学方法生产合成橡苔的方法在实际应用中存在一定的缺陷，限制了合成橡苔市场的发展。

发明内容

为解决上述化学方法生产合成橡苔的方法在实际应用中存在的问题，本发明提供一种产生4-O-去甲基巴尔巴地衣酸(CAS:20372-89-8)的土曲霉菌株、该菌株在发酵生产4-O-去甲基巴尔巴地衣酸中的应用，及利用上述土曲霉菌株发酵生产4-O-去甲基巴尔巴地衣酸进而合成2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯的方法，同时还提供了利用4-O-去甲基巴尔巴地衣酸合成2,4-二羟基-3,6-二甲基苯甲酸甲酯(即合成橡苔)的方法。

首先，本发明提供一种产生4-O-去甲基巴尔巴地衣酸的土曲霉菌株，所述土曲霉菌株为土曲霉(Aspergillus terreus)MEFC06，已于2018年6月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏中心登记入册编号为：CGMCC No.15890。

第二，本发明提供上述产生4-O-去甲基巴尔巴地衣酸的土曲霉菌株在发酵生产4-O-去甲基巴尔巴地衣酸中的应用，包括以下步骤：

(1)土曲霉种子液的制备，种子液接种到发酵培养基中发酵培养；

(2)发酵液分离纯化得到4-O-去甲基巴尔巴地衣酸。

步骤(1)中所述种子液的制备，具体为：将土曲霉MEFC06接种到PDA平板培养基上，28℃培养2-9天，将平板上的孢子接种到种子培养基中，接种量为10⁶-10⁸个/35mL，28℃、220rpm摇床培养培养1-5天，得到种子液。

步骤(1)中种子液接种到发酵培养基的接种量为按二者体积比3:35。