[发明专利]一种外源表达BAK1蛋白的方法

权利要求书

1.一种外源表达BAK1蛋白的方法，其特征在于，包括步骤：

(1)获得BAK1胞外结构域的外显子基因；BAK1胞外结构域的外显子基因通过以下方法获得：以拟南芥cDNA为模板，以SEQ ID NO.4-5所示的核苷酸序列为引物扩增得到；

所述BAK1胞外结构域的外显子基因的C末端加上His标签，采用在3’-5’端引物上加上6个组氨酸密码子序列和终止密码子序列，使阅读框一直向下读取直至到读取完His标签的密码子，然后读取完终止密码子，翻译结束；

(2)采用BamH1和Xho1对BAK1片段和真核表达载体分别进行酶切，酶切后将BAK1片段连入真核表达载体上，得到外源表达载体；

所述BAK1片段是带有N端自身信号肽的步骤(1)所述BAK1胞外结构域的外显子基因，所述带有N端自身信号肽的序列如SEQ ID NO.3所示；所述真核表达载体为pFastBac^TM1；

(3)外源表达载体转染昆虫细胞，获得重组杆状病毒，病毒侵染昆虫细胞，培养该昆虫细胞后，收获细胞和上清，通过SDS-PAGE验证正确构象蛋白时采用不含有DTT的loadingbuffer；上清液经层析，纯化后获得构象正确的BAK1蛋白；

其中，BAK1蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

其中，步骤(1)所述BAK1胞外结构域的外显子基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.权利要求1所述的方法制备得到的BAK1蛋白。

3.权利要求1所述的方法或权利要求2所述的BAK1蛋白的以下任一种应用：

(1)在筛选可以激活植物免疫反应的小分子药物中的应用；

(2)在研制植物抗病药中的应用；

(3)在提高植物抗病表型或提高植物产量中的应用。